ИСТИНА

Было показано, что для оптимального выполнения своей функции спермоспецифичная форма глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDS) обладает рядом свойств, характерных только для этой формы и отсутствующих у соматической формы GAPD. Так, GAPDS значительно стабильнее, чем GAPD (Тм и , соответственно). Для GAPDS характерна положительная кооперативность по связыванию кофактора NAD, тогда как соматическая форма GAPD связывает кофактор с выраженной отрицательной кооперативностью. Поскольку пространственная структура обеих форм известна, то их сравнительный анализ позволяет выявить те аминокислотные остатки, которые могут отвечать за повышение стабильности и кооперативные взаимодействия. Нами были получены рекомбинантные формы GAPDS, лишенные N-концевого домена, ответственного за связывание фермента с цитоскелетом хвоста сперматозоидов и не влияющего на каталитические свойства фермента, а также мутантные формы GAPDS. Были проведены точечные замены тех остатков, которые могли бы изменить кооперативные свойства белка или его стабильность. Было доказано, что замены (далее маленький кусок из статьи про стабильность). Одна замена привела к полному исчезновению положительной кооперативности, причем каталитическая активность фермента увеличилась до значений, характерных для соматической формы GAPD. Таким образом, нам удалось получить мутантную форму GAPDS, сохранившую высокую стабильность GAPDS, но с высокой каталитической активностью и без положительной кооперативности по связыванию кофактора, мешающей при использовании ферментов в биотехнологических процессах.