ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
ОТЛИЧИЯ ВРЕМЕНИ ЖИЗНИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ТРИПТОФАНОВЫХ ОСТАТКОВ В РЦ ПУРПУРНЫХ БАКТЕРИЙ ЗАМОРОЖЕННЫХ ДО 80 К В ТЕМНОТЕ ИЛИ НА АКТИВИРУЮЩЕМ СВЕТУ Differences of tryptophane fluorescence life time in purple bacteria RCs frozen to 80 K in the dark or on activating light Нокс П.П., Красильников П.М., Корватовский Б.Н., Гришанова Н.П., Сейфуллина Н.Х., Пащенко В.З., Рубин А.Б. Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119992 Москва, Ленинские горы 1, стр. 12; e-mail: knox@biophys.msu.ru Фотосинтетические реакционные центры (РЦ) бактерий Rb. sphaeroides охлаждали до 80 К в темноте или на активирующем свету в условиях реализации обратимого фотопереноса электрона между димером бактериохлорофилла (Р) и хинонными акцептороми и измеряли времена жизни триптофановых остатков в структуре РЦ, для чего использовали установку счета фотонов TCSPC Simple Tau 140. Флуоресценцию возбуждали лазером EPLED при 280 нм. Флуресценцию образцов регистрировали с помощью 16-канального многоанодного фотоумножителя Hamamatsu К5900. Кинетику флуоресценции апроксимировали модельной кривой в двухкомпонентном приближении, среднее время жизни (τср)вычисляли как сумму произведений времен и весов соответствующих компонентов. τср при 295 К для РЦ в водно-глицериновой (70%) среде, измеренное в максимуме интенсивности флуоресценции при ≈ 330 нм, составляло 1,5-2 нс. Максимум интенсивности флуоресценции в замороженных до 80 К РЦ сдвигался к ≈ 320 нм, τср в охлажденных до 80 К в темноте РЦ удлинялось до 2,5-3 нс, в охлажденных на свету РЦ оно было на 0,2-0,3 нс короче. Различия в τср сохранялись при последующем нагревании этих образцов до ~ 250 К, после чего они нивелировались. В сухой пленке РЦ τm при 295 К составляло ≈ 0,8 нс, при 80 К - ≈ 0,9 нс. Разницы при охлаждении в темноте или на свету сухой пленки РЦ не выявлено. Был выполнен компьютерный расчет колебательного спектра молекулы триптофана и определены нормальные колебательные моды, связанные с деформационными колебаниями ароматических колец триптофана, которые могут быть активными в процессе ее безизлучательного перехода из возбужденного в основное состояние. Наблюдаемые различия в τср для охлаждаемых в темноте или на свету РЦ могут быть связаны со сменой активности этих колебательных мод, что обусловлено локальными изменениями микроокружения триптофанилов в структуре РЦ при световой активации, фиксируемыми последующим замораживанием РЦ на свету. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований, грант № 13–04–00403а.