ИСТИНА

Окислительный (ОКС) и воспалительный (ВС) стрессы играют важную роль в патогенезе таких социально значимых заболеваний, как атеросклероз, сахарный диабет, ишемическая болезнь сердца, канцерогенез, ревматоидные, нейродегенеративные (болезни Паркинсона, Альцгеймера). Диагностика и прогностика ОКС и ВС, а, следовательно, оценка риска развития заболеваний и эффективности лечения вышеперечисленных заболеваний основаны на определении комплекса специфических маркеров, к которым относятся фенольные соединения различного строения (катехоламины и их метаболиты, флавоноиды). Информация о содержании таких маркеров позволяет не только оценить степень ОКС и ВС и эффективность защитных сил организма в противодействии им, но и косвенно выявлять сопутствующие заболевания. Многообразие и неустойчивость таких маркеров в биологических объектах обусловливают потребность в чувствительных, но при этом простых, точных и экспрессных (длительность анализа не должна превышать 15-30 мин) методах их определения в биологических объектах. Существующие инструментальные методы (например, ВЭЖХ-МС) и сенсорные (ферментативные и иммунохимические) системы для определения маркеров ОКС и ВС и лекарственных препаратов не удовлетворяют в полной мере предъявляемым требованиям. В связи с этим целью работы явилось создание флуоресцентных индикаторных систем для определения в биологических жидкостях и фармацевтических объектах широкого круга катехоламинов и их метаболитов, а также флавоноидов на основе реакции их ферментативной дериватизации ароматическими аминами (бензиламином и дифенилэтилендиамином (ДЭД)). Для значительного повышения экспрессности анализа при выяснении условий проведения индикаторных реакций и разработке соответствующих методик использовали 96-луночные полистирольные планшеты, а аналитический сигнал измеряли с помощью спектрофлуориметра Cary Eclipse фирмы Agilent c планшетной приставкой. На основе предложенного подхода в присутствии бензиламина и ДЭД были разработаны методики определения катехоламинов и их метаболитов (допамина, норадреналина, метил-L-ДОПА, ванилилминдальной и гомованилиновой кислот), позволяющие определять указанные аналиты на уровне их наномолярных содержаний (2.5 – 100 нМ). Также были разработаны методики определения ряда флавоноидов (кверцетина, дигидрокверцетина, эпикатехина и кофейной кислоты) в диапазоне концентраций 0.1 - 10 мкМ в водных, водно-органических и мицеллярных средах при использовании в качестве дериватизирующего агента ДЭД. Предложенный подход позволяет анализировать одновременно до 20 проб биологических жидкостей практически без предварительной пробоподготовки и отделения матрицы образцов, а также оценивать качество растительного сырья и фармацевтических объектов. Время анализа составляет от 5 до 30 мин в зависимости от количества образцов. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных исследований (грант № 15-03-05064-a).