ИСТИНА

Иммобилизованные протеазы могут быть использованы в двух процессах - гидролизе пептидов или белков в водных средах (пищевая промышленность и протеомные исследования) и в образовании пептидной связи в неводных системах (синтез лекарственных препаратов, субстратов, ингибиторов пептидной природы и т.д.). Стабильность ферментов довольна низка вследствие автолиза в водных средах и денатурации в среде полярных органических растворителей. Основная задача этого исследования состояла в создании иммобилизованных биокатализаторов, способных проявлять высокую эффективность в средах различного состава. Хитозан, природный гидрофильный полисахарид, был использован как матрица, содержащая большое количество функциональных групп и обладающая способностью к образованию пленок различной геометрии. Для иммобилизации были использованы субтилизин, химотрипсин и папаин – протеазы различных семейств и различного происхождения. С использованием субтилизина были подобраны оптимальные условия проведения иммобилизации. Пленки биокатализаторов, полученные в оптимальных условиях, обладали высокой стабильностью – в течение первых двух недель активность сохранялась на уровне 100 %, и даже через 6 месяцев остаточная активность составляла 87 %. Активность иммобилизованных ферментов по сравнению с нативными была выше при кислых и щелочных значениях рН, а также при 60-80градусах. Толщину (200-800 нм) и морфологию пленок изучали с использованием метода АСМ. Было показано, что содержание ферментов на носителе составляет до 120 мг/г носителя. Нестабильность протеаз в полярных органических растворителях является одной из причин их ограниченного использования в тонком органическом синтезе. Мы проверили операционную стабильность и активность полученных биокатализаторов в различных органических растворителях . Было показано, что при инкубации иммобилизованных биокатализаторов в ацетонитриле 100 % -ная активность сохранялась в течение 3 суток, затем в течение 2-х недель наблюдалась некоторая инактивация биокатализаторов, однако даже через 18 суток все исследованные препараты сохраняли до 70 % первоначальной активности. Все препараты проявляли высокую синтазную активность и были способны катализировать образование пептидной связи в смеси ДМФА/ацетонитрил (60/40 об. %).