ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Современные методы получения пептидных субстратов базируются в основном на стратегии химического пептидного синтеза в растворе и на твердой фазе (ТПС). Использование химического метода образования пептидных связей сопряжено с необходимостью блокирования и демаскирования боковых радикалов полифункциональных аминокислот, проведением трудоемких операций по выделению целевых соединений, опасностью рацемизации. Особую проблему при химическом синтезе представляет введение в структуру субстрата маркерной хромогенной или флуорогенной группы (в варианте ТПС). Применение ферментов на отдельных стадиях пептидной конденсации позволяет преодолеть многие из указанных ограничений. Нами разработаны химико-энзиматические подходы к синтезу высокоспецифичных хромогенных и флуорогенных субстратов цистеиновых и сериновых протеиназ общей формулы A-Xaa-Yaa-B, где А = Z (бензилоксикарбонил), Glp (пироглутамил) или Abz (о-аминобензоил); B = pNA (п-нитроанилид), AMC (7-амидо-4-метилкумарин) или AFC (7-амидо-4-трифторметилкумарин); Xaa = Phe, Val, Ala-Ala, Ala-Glu, Ala-Ala-Leu, Ala-Ala-Arg, Ala-Ala-Glu, Thr-Ala-Thr; Yaa = Ala, Arg, Asp, Gln, Leu, Phe, Cys(SBzl). Синтез субстратов может быть осуществлен по универсальной схеме в смеси полярных органических растворителей под действием протеиназ, иммобилизованных на криогеле поливинилового спирта, а также субтилизина Карлсберг в комплексе с додецилсульфатом натрия. Проведение реакций ферментативного пептидного синтеза в неводных средах способствует эффективному смещению равновесия реакций пептидной конденсации в сторону синтеза, минимизирует протекание гидролитических процессов, увеличивает растворимость гидрофобных соединений.