ИСТИНА

На сегодняшний день разработан широкий спектр препаратов для борьбы с ВИЧ инфекцией. В основном это ингибиторы вирусных ферментов: обратной транскриптазы, протеазы и интегразы (ИН). Ключевая проблема при их применении – развитие лекарственной устойчивости вируса. Перспективным подходом к решению этой проблемы является разработка ингибиторов взаимодействия вирусных белков с клеточными белками-помощниками. Однако развития этого подхода тормозится из-за недостаточности знаний об участии клеточных белков в патогенезе ВИЧ-инфекции. Ранее было показано, что клеточный белок Ku70 образует комплекс с ИН ВИЧ-1 в клеточной системе, однако, ни структура, ни функциональное значение этого взаимодействия не были установлены. Мы изучили взаимодействие между этими белками в in vitro системе. Было установлено, что эти белки образуют стабильный комплекс (Кд=70 нМ). Используя серию делеционных мутантов как ИН ВИЧ-1, так и Ku70, мы установили структурные детерминанты, важные для образования комплекса между этими белками: в составе Ku70 сайт связывания интегразы локализован в N-концевом домене (1-250 а.о.), а со стороны интегразы в связывании Ku70 принимают участие аминокислотные остатки α6-спирали (200-220 а.о.). Более того, путем сайт направленного мутагенеза аминокислотных остатков в составе α6-спирали ИН, мы установили, что ключевую роль в образовании комплекса играют аминокислотные остатки E212 и L213 интегразы ВИЧ-1, замены которых на аланин значительно снижают стабильность комплекса ИН/Ku70. Также мы обнаружили, что конъюгат 11-звенного 2'-О-метилированного олигорибонуклеотида с эозином (11-ОМ-Е) ингибирует образование комплекса ИН с Ku70 (IC50=25 нМ), экранируя аминокислотные остатки в составе α6-спирали ИН. При трансдукции клеток HEK293T или Jurkat (лимфоидная линия) вектором на основе ВИЧ-1, содержащим интегразу с заменами E212А/L213А, оказалось, что его инфекционная способность в 4-5 раза ниже, чем вектора с нативной интегразой. Аналогичные результаты были получены для первичных мононуклеарных клеток (PBMC) из крови здоровых доноров. Мы установили, что введение в состав ИН этих мутаций не влияет на обратную транскрипцию или интеграцию вирусной ДНК, но снижает эффективность постинтеграционной репарации (в 4-5 раз). Следовательно, для успешной репарации необходимо взаимодействие ИН ВИЧ-1 с клеточным белком Ku70. Вероятно, именно образование комплекса ИН с Ku70 является сигналом для запуска постинтеграционной репарации, а этот комплекс может рассматриваться как принципиально новая мишень для разработки ингибиторов репликации ВИЧ-1. Работа поддержана Российским научным фондом (грант РНФ № 17-14-1107) и Российским фондом фундаментальных исследований (грант РФФИ № 17-04-01178).