ИСТИНА

Митоз – важный процесс, при котором происходит распределение генетического материала между дочерними клетками при делении. В этом процессе ключевым является взаимодействие между динамическими полимерами тубулина – микротрубочками (МТ) и белковым супер-комплексом на хромосомах – кинетохором. CENP-F – фибриллярный белок массой 350кДа локализован в кинетохоре в течении G2 фазы митоза. Он важен для закрепления кинетохора на микротрубочке и необходим для правильной ориентации веретена деления [1]. Структура CENP-F состоит из расположенных на N- и C-конце МТ-связывающих доменов, и участка суперспирали между ними [2]. Данные по соосаждению и электронной микроскопии предполагают, что N-концевой фрагмент CENP-F лучше связывается с изогнутыми протофиламентами микротрубочек, чем со стабилизированными таксолом прямыми. Поэтому CENP-F рассматривается как возможный кандидат на роль сопрягающего устройства между кинетохором микротрубочкой, которая способна развивать силы, достаточные для перемещения грузов [3]. Для исследования были созданы генетические конструкции отдельно для N- и C-концевых фрагментов CENP-F. Каждая конструкция включает МТ-связывающий домен и небольшой участок суперспирали CENP-F, а также расположенный на другом конце суперспирали вариант зеленого флуоресцентного белка с улучшенной способностью сворачиваться (superfolded GFP или sfGFP). Взаимодействие CENP-F с микротрубочками, которые были помечены флуорофором HyLite или родамином, визуализировалось с помощью флуоресцентной микроскопии в режиме полного внутреннего отражения. Было показано, что фрагменты CENP-F диффундируют вдоль МТ и имеют различные коэффициенты одномерной диффузии. Оценены константы диссоциации одиночных молекул для обоих фрагментов CENP-F, их значения согласуются с литературными данными. Показана зависимость в связывании от концентрации соли, что говорит о существенном вкладе электростатических взаимодействий. Обработка МТ субтилизином полностью нарушает связывание С-концевого фрагмента, в то время как у N-концевого фрагмента характер связывания становится диффузным, что может говорить также о различии в механизмах связывания фрагментов CENP-F. 1. Laoukili J, Kooistra MR, Bras A, Kauw J, Kerkhoven RM, et al. (2005) Nat Cell Biol, 7: 126-136 2. Feng J, Huang H, Yen TJ. (2006) Chromosoma, 115: 320-329 3. Grishchuk EL, McIntosh JR. (2006) EMBO J. 25(20): 4888–4896.