ИСТИНА

Известно, что митохондрии печени крысы, изолированные методом дифференциального центрифугирования, содержат 2-15 нмоль Ca2+/мг белка и могут освобождать этот катион. При исследовании кинетики Ca2+-зависимых процессов целесообразно работать с митохондриями, не освобождающими Ca2+ в условиях опыта. Для получения такого препарата на одной из промежуточных стадий выделения митохондрии де-энергизовали ротеноном и инкубировали 0 40 минут при 25оС, создавая тем самым условия для выхода Ca2+ по концентрационному градиенту. Оказалось, что увеличение времени тепловой инкубации приводит к экспоненциальнму уменьшению содержания Ca2+ в митохондриях от 10 до 0.5 нмоль/мг белка с t(1/2)?2 мин. Дыхательный контроль всех полученных препаратов, окисляющих сукцинат, был 4-5. Было показано, что освобождение эндогенного Ca2+ прекращается у митохондрий, содержащих ~0.5 нмоль Ca2+/мг белка, а скорость активированного транспорта Ca2+ одинакова для всех препаратов. Таким образом, были получены не освобождающие Ca2+ интактные митохондрии, пригодные для исследования кинетики Ca2+-зависимых процессов