ИСТИНА

Витамины B6 и В1 играют важную роль в метаболизме нейромедиаторов, причем недавно обнаружена регуляция витамином В1 метаболизма витамина В6 [3]. Пиридоксин-5’-фосфатоксидаза (ПНПО) катализирует важную реакцию в реутилизации пиридоксаля из пиридоксина и пиридоксамина. Пиридоксалькиназа (ПЛК) катализирует превращение пиридоксаля в пиридоксаль-5’-фосфат. Нарушение гомеостаза пиридоксаль-5’-фосфата в тканях, в частности, при дефиците активностей ПНПО и/или ПЛК, приводит к тяжелым эпилептическим энцефалопатиям [2]. С другой стороны, эпилептический статус у грызунов вызывает локальное или системное введение хемоконвульсантов. В широко примененяемой пентилентетразоловой модели конвульсной эпилепсии используют хемоконвульсант коразолового ряда – пентилентетразол (ПТЗ), действие которого направлено на нейротрансмиссию ГАМК [1]. В свою очередь, биосинтез ГАМК зависит от витаминов В6 и В1. В связи с этим мы предположили влияние этих витаминов на индуцируемую ПТЗ эпилепсию. Целью работы была характеристика такого влияния путем измерения витамин-зависимых ферментов мозга крысы. Нами была разработана оригинальная методика определения активности ПНПО в гомогенате мозга крысы. Выделяющийся в катализируемой ПНПО реакции пероксид водорода определяли по пероксидазной реакции окисления AmplexRed Ultra с образованием флуоресцирующего продукта. Активность ПЛК измеряли по флуоресценции продукта превращения пиридоксальфосфата под действием гидроксиламина [4]. Активность ПНПО снижалась под действием витаминов в норме и после эпилепсии у самцов и самок. Эпилепсия снижала активность ПНПО только у самцов и независимо от добавления витаминов. Активность ПЛК падала под действием витаминов в норме и после эпилепсии только у самцов. У самок эпилепсия повышала активность ПЛК независимо от добавления витаминов. Таким образом, обнаружены гендерные различия в реактивности ферментов метаболизма пиридоксаля к витаминам и эпилепсии. Использованные методы определения активности ПНПО и ПЛК имеют высокий потенциал для клинической диагностики нарушений метаболизма витамина В6 в образцах биоматериала пациентов. Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант №18-54-7812\18 Буник В.И.) Литература 1. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. Нейрохимия: учебник для биологических и медицинских ВУЗов. М.: ИБМХ РАН. 1996. 2. Di Salvo, M.L., Contestabile, R., Safo, M.K. Vitamin B-6 salvage enzymes: Mechanism, structure and regulation // Biochimica Et Biophysica Acta-Proteins and Proteomics. 2011. No. 1814(11). p. 1597-1608. 3. Mkrtchyan, G., Aleshin, V., Parkhomenko, Y., Kaehne, T., Di Salvo, M.L., Parroni, A., et al. Molecular mechanisms of the non-coenzyme action of thiamin in brain: biochemical, structural and pathway analysis // Sci Rep. 2015. No. Jul 27;5:12583. 4. Sussmane, S., Koontz, J. A fluorometric assay for pyridoxal kinase applicable to crude cell extracts // Anal. Biochem. 1995. No 225, p. 109–112.