ИСТИНА

Иммобилизованные протеиназы используются в различных областях фармацевтики, медицины и пищевой промышленности. Изменение свойств ферментов при иммобилизации, появление таких качеств, как устойчивость к изменениям температуры, рН, состава растворителей; возможность многократного применения, уменьшение загрязненности продуктов реакции – все это привлекает серьезное внимание к иммобилизованным ферментам на протяжении последних десятилетий. Субтилизин и химотрипсин были иммобилизованы на хитозане, деацетилированном производном природного полисахарида хитина. Оригинальный способ получения позволяет достигать равномерного распределения фермента в образце и высоких значений нагрузки. Исследовано влияние температуры, рН, концентрации сшивающего реагента, содержания фермента на ферментативную активность образцов. Показано, что хитозан предохраняет фермент от инактивации при хранении в различных средах. Структура образцов изучена методом АСМ. Толщина пленок составляет 200-800 нм в зависимости от способа получения. При изменении состава среды, добавлении органических растворителей, появляется возможность использовать протеиназы в реакциях, обратных гидролизу – в синтезе пептидов. Известно, что добавление гидрофильных органических растворителей сильно инактивирует ферменты, и здесь иммобилизация является незаменимым способом увеличения активности ферментов. Субтилизин, химотрипсин, трипсин, пепсин и термолизин были иммобилизованы на криогеле поливинилового спирта в присутствии различных сшивающих реагентов. Все препараты ферментов способны катализировать синтез пептидов в неводных средах, при этом специфичность некоторых из них значительно расширяется. Разработаны биокаталитические системы для направленного синтеза хромогенных и флуорогенных субстратов, пригодных для тестирования катепсиноподобных цистеиновых протеиназ – маркеров различных заболеваний. Работа поддержана грантом РФФИ 06-03-33056