ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Метилирование ДНК, осуществляемое ДНК-метилтрансферазами (МТазами), – одна из наиболее активно изучаемых эпигенетических модификаций, играющая важную роль в контроле экспрессии генов в клетках эукариот. В раковых клетках наблюдается гиперметилирование промоторных областей генов-супрессоров опухолей. Ингибиторы МТаз вызывают реактивацию этих генов, что позволяет рассматривать МТазы как мишени для противораковой терапии. Ранее в качестве ингибиторов МТаз были использованы димерные бисбензимидазолы, DB(n), в которых n - число метиленовых звеньев, соединяющих бисбензимидазольные фрагменты [1]. Была показана способность соединений DB(n) ингибировать активность эукариотической МТазы Dnmt3a in vitro, а также получены первые данные о влиянии этих соединений на метилирование геномной ДНК. Однако плохая растворимость DB(n) в воде препятствовала их применению в живых системах. Были сконструированы димерные бисбензимидазолы с пиперазиновым циклом в олигометиленовом линкере между бисбензимидазольными фрагментами, DBP(n), которые лучше растворялись в воде. Эти соединения в микромолярных количествах ингибировали модельную прокариотическую МТазу М.SssI. Целью работы стало изучение влияния DBP(1-4) на метилирование ДНК в клетках рака молочной железы MCF7 и эмбриональных фибробластов легкого Ф-977. Известно, что в клетках MCF7 CpG-островки, расположенные в промоторных областях генов-супрессоров опухолей, гиперметилированы. Исследование включало следующие этапы: культивирование клеток MCF7 и Ф-977 в присутствии соединений DBP(1-4), лизис клеток и выделение геномной ДНК с удалением белков путем фенол-хлороформной экстракции, ферментативный гидролиз геномных ДНК до нуклеозидов и анализ содержания 5-метил-2’-дезоксицитидина с помощью ультраэффективной жидкостной хроматографии с детекцией методом тандемной квадрупольной масс-спектрометрии (UPLC/MS/MS). Получены первые данные о том, что DBP(1-4) могут изменять статус метилирования геномной ДНК в раковых и нормальных клетках. 1. Cherepanova N.A., Ivanov A.A., Maltseva D.V., Minero A.S., Gromyko A.V., Streltsov S.A., Zhuze A.L., Gromova E.S. J Enzyme Inhib Med Chem, 2011, 26, 295-300.