ИСТИНА

Введение. Прикрепление клеток к субстрату, их распластывание, движение, расселение, морфогенез и регуляция организации актина обусловлены возникновением фокальных контактов (ФК). Состав ФК определяется происхождением клеток и их миграторным потенциалом. Нарушение регуляции адгезии клеток тесно связано с процессами инвазии и малигнизации опухолей. Цель. Получить клетки культуры плоскоклеточного рака человека А431, в которых визуализирован белок винкулин (метод транзиентной трансфекции), описать морфометрические (средняя площадь) и динамические (время жизни, интегральная яркость) параметры, сравнить полученные данные с параметрами ФК в клетках аденокарциномы лёгкого А549. Материалы и методы. В суточной культуре линии А431 визуализировался белок винкулин при помощи плазмиды vinculin-RFP (метод транзиентной трансфекции). На флуоресцентном микроскопе Nikon TiE методом прижизненной цейтраферной съемки (интервал между кадрами 5 минут, х60, 120 кадров) были визуализированы клетки с временной экспрессией таргетного белка. На этих фильмах с использованием ПО ImageJ были измерены время жизни, площадь и максимальная интенсивность ФК на периферии клетки (в теле клеток фокальные контакты отсутствовали). Границу между периферией и телом клетки проводили условно на расстоянии 10 мкм от края плазматической мембраны. Полученные данные сравнивали с аналогичными данными для линии А549. Результаты. Время жизни фокальных контактов в клетках линии А431 меньше в 1,5 раза, чем в линии А549 (медиана 35 мин против 50 мин соответственно). Площадь фокальных контактов в клетках линии А431 меньше в 3 раза, чем в клетках линии А549 (медиана 0,56 мкм2 против 1,71 мкм2 соответственно), однако интенсивность фокальных контактов в линии А431 больше в 2,3 раза, чем в линии А549 (медиана 1,65 против 0,72 усл. ед. фл.). Фокальные контакты в теле клетки отсутствуют в линии А431, однако присутствуют в линии А549. (40 контактов). Различия для всех групп оказались статистически достоверными (для всех групп p ≤ 0,01, тест Манна-Уитни). Вывод. ФК в клетках карциномы А549 являются более стабильными и долгоживущими, что может негативно сказываться на миграторном потенциале этого типа опухолевых клеток.