ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
В рамках создания ингибиторов биосинтеза белка с использованием компьютерного моделирования осуществлен дизайн и синтез аналога 3'-конца пептидил-тРНК, представляющего собой ковалентный конъюгат пептидо-нуклеиновой кислоты (PNA), дезоксиаденозина и «стоп»-пептида. Такого рода соединения представляют интерес как зонды для изучения функционирования рибосомы и как вещества, на основе которых могут быть созданы антибиотики нового поколения. PNA являются аналогами нуклеиновых кислот, в которых сахаро-фосфатный остов заменен на псевдопептидную цепь с присоединенными к ней нуклеиновыми основаниями. Следует отметить, что данные соединения образуют более прочные комплексы с РНК. Для связывания с P-сайтом пептидил-трансферазного центра (ПТЦ) рибосомы был выбран конъюгат пептидо-нуклеиновой кислоты, содержащей 2 остатка цитозина (CaegCaeg), с 2’-дезоксиаденозином. С помощью компьютерного моделирования была показана возможность образования Уотсон-Криковских пар цитозиновых остатков PNA с нуклеотидами G2251 и G2252 23S рРНК, которые используются пептидил-тРНК при специфическом связывании с Р-сайтом ПТЦ. Дезоксиаденозин вводился для обеспечения возможности формирования необходимой конформации «стоп»-пептида Met-Arg-Leu, ковалентно связанного с 3'-концом дезоксирибозы. Данный пептид, будучи расположенным в рибосомном туннеле в составе пептидил-тРНК, в присутствии эритромицина вызывает остановку трансляции сигнального полипептида. Такого рода конъюгаты позволят выявить химическую природу специфических сайтов, локализованных в рибосомном туннеле и отвечающих за взаимодействие с аминокислотными остатками растущей полипептидной цепи. Осуществлен синтез конъюгата Ac-Met-Arg-Leu-dА-Сaeg-Сaeg. Схема синтеза включала твердофазный синтез пептида Ac-Met-Arg-Leu-OH и PNA; модификацию 3’-гидроксила защищенного 2'-дезоксиаденозина полученным пептидом; присоединение защищенного по амино-группам производного PNA по 5’-гидроксильной группе 2’- дезоксиаденозина, деблокирование конъюгата. Очистку полученных соединений проводили с помощью колоночной хроматографии и ВЭЖХ, строение доказывали методами масс-спектрометрии, ЯМР и УФ-спектроскопии.