ИСТИНА

Димерный фермент простагландин H синтаза (циклооксигеназа, PGHS) является центральным звеном в биосинтезе простагландинов – регуляторов важных физиологических процессов, медиаторов боли и воспаления. Для фермента характерна быстрая инактивация в процессе катализируемых реакций. Ингибирование PGHS обусловливает фармакологическое действие нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП). В литературе обсуждается довольно много механизмов ингибирования PGHS (обратимые/необратимые, одно-, двух- и трехстадийные). НПВП принято делить на «медленные» и «быстрые». Несмотря на большое количество работ, посвященных НПВП, кинетический механизм действия этих веществ до конца не установлен. В нашей работе предложена схема экспериментального изучения кинетического механизма действия НПВП, включающая как измерение временных зависимостей ассоциации и диссоциации фермент-ингибиторных комплексов, так и получение зависимости относительной активности от концентрации ингибитора в равновесных условиях. В рамках предложенной схемы изучено взаимодействие ингибиторов с ферментом в предстационарном и равновесном режимах, определены равновесные константы ингибирования и элементарные константы прямой и обратной реакций. Отмечено, что, чем «быстрее» ингибитор, тем слабее он связывается с PGHS-1. В случае индометацина, диклофенака, кеторолака, ибупрофена показано, что механизм действия этих НПВП описывается простой одностадийной схемой, а в случае напроксена – одностадийной схемой с учётом предполагаемого кооперативного взаимодействия циклооксигеназных активных центров гомодимера PGHS-1. Также показано, что все эти ингибиторы полностью обратимы. Замечен парадоксальный эффект, заключающийся в том, что присутствие ингибитора, уменьшая скорость ферментативной реакции и наблюдаемую скорость инактивации фермента в процессе реакции, в некоторых случаях приводит к повышению конечного выхода продукта реакции.