ИСТИНА

Введение: Острое почечное повреждение (ОПП) является широко распространённой патологией с высокой смертностью. Преренальная и ренальная формы ОПП являются следствием гипоперфузии почки. Одним из методов, защищающих паренхиму почки от ишемического поражения, является ишемическое прекондиционирование (ИПК), заключающееся в увеличении толерантности ткани к действию длительной ишемии с последующей реперфузией (И/Р) при предварительном воздействия одного или нескольких эпизодов кратковременной И/Р. Известно, что защитное действие наблюдается при прекондиционировании ишемическими эпизодами длиной в несколько минут, однако неизвестно, обладают ли таким же действием более короткие промежутки ишемии. Цель исследования: Целью данной работы было исследовать влияние сверхкороткого прекондиционирования (СК-ИПК) на И/Р почки, а также изучить влияние старения на данный феномен. Материалы и методы: И/Р почки in vivo моделировали на самцах крыс путём пережатия сосудистого пучка левой почки атравматическим зажимом на 40 минут, с последующим восстановлением кровотока. СК-ИПК заключалось в 4-х циклах, состоящих из 15 секунд ишемии и 15 секунд реперфузии, непосредственно перед наложением зажима на 40 минут. Данные манипуляции проводили на молодых (4-5 месяцев) и старых крысах (20-23 месяца). Тяжесть И/Р оценивали через 48 часов по уровню в сыворотке крови креатинина и мочевины. Часть крыс через 40 минут после реперфузии перфузировали 4%-водным раствором формальдегида, почку извлекали. Срезы зафиксированных почек исследовали с помощью иммуногистохимического окрашивания антителами против ацетилированного лизина, а также фаллоидином (окраска актина), конъюгированным с тетраметилродамином. Для каждого среза подсчитывали: а) процент канальцев с высоким уровнем ацетилирования в ядрах клеток; б) процент проксимальных канальцев (по наличию щеточной каемки); в) процент проксимальных канальцев с высоким уровнем ацетилирования в ядрах клеток. Анализировали не менее 10 полей зрения для каждого среза. Интенсивности процессов аутофагии оценивали при помощи окраски переживающих срезов коры почки флуоресцентным красителем Lysotracker. Срезы сравнивали по средней интенсивности флуоресценции. Результаты: Через 48 часов после И/Р уровень креатинина и мочевины в сыворотке крови увеличивается как у молодых, так и у старых крыс, в 8 и 6,6 раз, в 6 и 5,8 раз соответственно, что свидетельствует о развитии ОПП. СК-ИПК уменьшает уровень креатинина и мочевины у молодых крыс на 38% и 40% соответственно. У старых животных СК-ИПК не оказывает влияния на тяжесть почечной недостаточности. У молодых интактных животных наблюдали высокий уровень ацетилирования только в ядрах канальцев, не имеющих щёточной каёмки. У старых животных наблюдали увеличение процента канальцев с высокими уровнем ацетилирования в ядрах (на 52%), по сравнению с молодыми, в том числе отмечали ацетилирование ядер проксимальных канальцев. Процент канальцев с высоким уровнем ацетилирования ядер клеток возрастает через 40 минут после И/Р и у молодых, и у старых крыс. У молодых крыс после И/Р также возникает ацетилирование ядер проксимальных канальцев. СК-ИПК возвращает профиль ацетилирования к норме у молодых крыс, однако, увеличивает уровень ацетилирования у старых крыс по сравнению с И/Р без СК-ИПК. Процент канальцев со щеточной каемкой остается на одном уровне как у молодых, так и у старых животных, как в контроле, так и после И/Р или И/Р с предварительной СК-ИПК. Окраска срезов почки флуоресцентным зондом Lysotracker выявила увеличение количества лизосом и аутофаголизосом через 24 часа после И/Р у молодых животных. Выводы: Таким образом, СК-ИПК оказывает защитное действие при И/Р почки у молодых крыс, уменьшая тяжесть ОПП и нормализуя процессы ацетилирования в ткани органа. Данные положительные эффекты исчезают у старых крыс.