ИСТИНА

В пищевой биотехнологии уровень D аминокислот можно использовать для определения качества пищевых продуктов. С увеличением времени хранения пищевых продуктов в основном происходит увеличение содержания D-Ala. Это связано с тем, что D Ala является основной D-аминокислотой пепетидогликана клеточной стенки бактерий. Активно развивающимся подходом для определения уровня D-аминокислот является использование биосенсоров на основе оксидаз D-аминокислот, которые не взаимодействуют с L- аминокислотами. Биосенсоры просты в использовании, экспрессные и относительно дешевые. Основным препятствием стала широкая субстратная специфичность имеющихся DAAO (в первую очередь из почек свиньи, дрожжей T.variabilis и R.gracilis, которые с D-Ala и D-Ser имеют близкие кинетические параметры). Это особенно важно в случае определения D-Ala, концентрация которого в клетке примерно в 10 раз ниже концентрации D-Ser. Поэтому в настоящее время самой важной задачей является получение препаратов DAAO высокоспецифичных или к D-Ala, или к D-Ser. Нами была получена DAAO из дрожжей Ogataea parapolymorpha DL1, высокоспецифичная к D-Ala. Причем его удельная активность оказалась минимум в два раза выше по сравнению с другими DAAO, описанными в литературе. Важным свойством для подбора условий реакции является температурная стабильность фермента. Детальные данные по кинетике инактивации и знание механизма инактивации фермента позволит подобрать оптимальные условия работы и хранения биосенсора. Кроме того, знание механизма инактивации необходимо при использовании методов рационального дизайна с целью повышения стабильности фермента. В данной работе изучена термоинактивация OpaDAAO1 в диапазоне температур 48-52 °C. Исследовано влияние начальной концентрации фермента и добавления дополнительных количеств молекулы FAD на кинетику термоинактивации. Исходя из полученных кинетически данных предположен механизм термоинактивации OpaDAAO1, проанализирована советующая кинетическая схема и определены константы инактивации OpaDAAO1. Работа выполнена при поддержке Гранта Президента Российской Федерации для государственной поддержки молодых российских ученых - кандидатов наук и докторов наук (МК-6239.2021.1.4).