ИСТИНА

Эффективное связывание ферментов с сенсорной поверхностью является одним из важнейших аспектов разработки биосенсоров. Во многом именно способ иммобилизации биомолекулы на поверхности сенсора определяет его чувствительность и операционную стабильность. Среди большого многообразия известных способов иммобилизации ферментов перспективным является метод модификации сенсорной поверхности пленками на основе стимулчувствительных полимерных микрогелей, способных обеспечить прочное многоточечное связывание с целевыми биомолекулами и обладающих при этом высокой сорбционной емкостью. До настоящего времени основным подходом к формированию микрогель-ферментных пленок являлось последовательное нанесение микрогеля и фермента на поверхность сенсора. В данной работе был предложен новый подход, основанный на формировании микрогель-ферментных комплексов в водном растворе с последующим нанесением образующегося комплекса на исследуемую поверхность. Данная работа посвящена исследованию формирования функциональных покрытий на основе комплексов рН- и термочувствительного микрогеля из сшитого сополимера N-изопропилакриламида и диметиламинопропилметакриламида (П(НИПАМ-со-ДМАПМА)) с ферментом глюкозооксидазой (ГО) при различных соотношениях компонентов. Условия формирования микрогель-ферментных комплексов (рН = 7) были выбраны на основании данных потенциометрического титрования водного раствора П(НИПАМ-со-ДМАПМА) и значения изоэлектрической точки ГО (pI = 4,2). Образование комплексов в водных растворах было подтверждено методом лазерного микроэлектрофореза. Адсорбция комплексов П(НИПАМ-со-ДМАПМА)/ГО была исследована методом пьезоэлектрического микровзвешивания с мониторингом диссипации (QCM-D), что позволило оценить зависимость массы образующейся микрогель-ферментной пленки от состава наносимого комплекса. Данный подход был также использован для формирования покрытий П(НИПАМ-со-ДМАПМА)/ГО на поверхности планарных графитовых электродов и создания амперометрических глюкозных биосенсоров на их основе. Полученные в ходе амперометрических измерений данные хорошо коррелируют с данными QCM-D: отклики таких сенсоров определяются массой микрогель-ферментной пленки. Полученные сенсорные системы проявляют высокую чувствительность и хорошую операционную стабильность. (с. 21)