ИСТИНА

В настоящее время известно большое количество ацилаз, которые используются в промышленности как биокатализаторы для производства антибиотиков, а также играют ключевую роль в образовании биопленок патогенными штаммами микроорганизмов. Семейство пенициллин ацилаз включает в себя пенициллин ацилазу, глутарил-7-АЦК ацилазу и ацил-гомосеринлактон ацилазу. Первые два фермента нашли практическое применение в биотехнологии для синтеза 6-АПК и 7-АЦК, которые являются предшественниками полусинтетических антибиотиков различных поколений [1]. Ацил гомосеринлактон ацилаза играет важную роль в чувстве кворума у бактерий [2]. Несмотря на огромное число уже изученных ферментов, все еще стоит необходимость в поиске новых ферментов, перспективных для использования в биотехнологии. Гены многих пенициллин ацилаз, глутарил-7-АЦК ацилаз, а также ацил-гомосеринлактон ацилаз из различных микроорганизмов до сих пор не выделены и не изучены. Целью данной работы был поиск бактериальных штаммов микроорганизмов, способных синтезировать различные ацилазы, которые раннее не были описаны, выделение генов, кодирующего ацилазы, и получение генетических конструкций, обеспечивающих эффективную и стабильную экспрессию этих ферментов в клетках E. coli. В данной работе был проведен биоинформатический анализ организмов, доступных в коллекции микроорганизмов МГУ (КМ МГУ), и выбраны те, в которых могут находиться ацилазы из семейства пенициллин ацилаз. Выбранные бактерии: B. cereus, B. polymyxa, P. fluorescence, P. aeruginosa и A. faecalis. На последующем этапе работы для каждого из выбранных организмов были сконструированы праймеры для проведения ПЦР с добавлением сайтов рестрикции, а также введением His-Tag для дальнейшего выделения и очистки фермента. Получены полные геномные ДНК для данных микроорганизмов и оптимизированы условия проведения ПЦР. Получены плазмиды, содержащие гены новых ацилаз семейства пенициллин ацилаз.