ИСТИНА

Оксидаза D-аминокислот является катализатором реакции окисления D-аминокислот в соответствующие иминокислоты с последующим гидролизом до α-кетокислот. Этот фермент играет важную физиологическую роль и находит широкое применение в биотехнологических процессах. Его используют в аналитической биотехнологии, в синтезе оптически активных соединений, для получения α кетокислот. Но наиболее важным является процесс окисления цефалоспорина С до 7 аминоцефалоспорановой кислоты, которая в свою очередь является исходным веществом в производстве цефалоспориновых антибиотиков разных поколений. Среди известных оксидаз D-аминокислот фермент, полученный из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO), обладают наилучшими каталитическими свойствами с цефалоспорином С. Поэтому TvDAAO является наиболее перспективным ферментом для применения в промышленности. Однако для практического применения необходимо проводить оптимизацию свойств исходного фермента под цели и задачи конкретного процесса. В нашей лаборатории были получены мутантные формы фермента с заменами лейцина в 38-м положении с целью кислородного канала TvDAAO. В рамках данной работы было проведено изучение кинетики термоинкативации мутантных TvDAAO. Температурная инактивация фермента происходит в две стадии. Во время первой происходит обратимая диссоциация молекулы фермента на две субъединицы; во второй – необратимая денатурация образовавшихся во время первой стадии субъединиц. В результате были получены значения константы первой и второй стадии инактивации и периоды полуинактивации для мутантных форм TvDAAO, и было проведено сравнение с соответствующими значениями для TvDAAO дикого типа.