ИСТИНА

Гидрофильная хроматография (ГИХ) — современный метод определения полярных веществ. Особым преимуществом данного метода является его удачное сочетание с масс-спектрометрией, поскольку подвижная фаза в ГИХ по сравнению с обращенно- фазовым режимом содержит больше органического растворителя, который придает ей летучесть и низкую вязкость. Однако, имеющиеся публикации по определению полярных веществ методом ГИХ-МС сообщают о недостатках коммерчески наиболее распространенных сорбентов на основе силикагеля, таких как низкая стабильность и смывание привитых к поверхности силикагеля функциональных групп, что серьезно загрязняет детектор. Именно поэтому применение новых способов модифицирования и синтез фаз для гидрофильной хроматомасс-спектрометрии является актуальной задачей. Мультикомпонентная реакция Уги как подход для ковалентного модифицирования сорбентов на основе силикагеля либо полимерной матрицы обладает рядом преимуществ, среди которых высокий выход реакции, хорошая воспроизводимость и доступность реагентов, простота и экспрессность получения такого рода сорбентов. В работе получены селективные и эффективные неподвижные фазы путем ковалентного модифицирования 3-аминопропилсиликагеля по реакции Уги, обеспечивающие возможность разделения 7 аминокислот с использованием 1 мМ фосфатного буферного раствора и ацетонитрила (20:80, об.%), УФ-детектирования при 210 нм, с эффективностью до 55000 тт/м. Для выбора подвижной фазы, совместимой с МС-детектированием, провели разделение модельной смеси аминокислот с использованием летучих аммонийно-ацетатного и аммонийно-формиатного буферных растворов и рефрактометрического детектирования. Варьировали pH и концентрацию буферных растворов в составе элюента. С точки зрения приемлемой формы пиков и экспрессности разделения установили оптимальный состав подвижной фазы: 20% 10 мМ аммонийно-формиатного буферного раствора (pH 4.7) и 80% ацетонитрила. Для наиболее гидрофильной колонки с сорбентом, полученным по реакции Уги с использованием 2-морфолиноэтилизоцианида, перспективным для разделения аминокислот, выбрали условия и параметры ионизации и масс-спектрометрического детектирования с целью достижения наибольшей интенсивности сигнала МС-детектора. С точки зрения сочетания чувствительности, разделения аминокислот и формы пиков, установили 0,8 мл/мин в качестве оптимальной скорости потока. При разделении аминокислот с МС-детектированием основной задачей являлось разделение пиков изомерных соединений: изолейцина и лейцина, лизина, серина и глутамина. Выбраны условия, обеспечивающие полное разрешение этих веществ и определение 16 аминокислот в режиме ГИХ-МС. Проведена оценка стабильности модифицированных предложенным способом неподвижных фаз.