ИСТИНА

Люцифераза светляков состоит из двух доменов: большого N-домена и малого С-домена, - взаимная локализация которых играет ключевую роль в люциферазном катализе. Известно, что в ходе реакции фермент поочередно принимает две конформации: 1) аденилирующую на стадии образования люцифериладенилата; 2) окисляющую на стадии его окисления. С использованием компьютерных моделей структур люциферазы в двух различных конформациях выявлены участки белка, локализованные вне активного центра, на которых возможно образование междоменных связей, стабилизирующих взаимное расположение доменов в той или иной конформации. Методами генетической инженерии получены данные, которые подтверждают наше предположение о том, что аденилирующая конформация характерна для структуры люциферазы не только на стадии образования люцифериладенилата, но и в момент испускания света и является существенно более стабильной, чем окисляющая конформация. Методами сайт-направленного и случайного мутагенеза получены люциферазы с измененными спектрами биолюминесценции. Показана важная роль ряда аминокислотных остатков малого С-домена в стабилизации желто-зеленого эмиттера. Получены мутантные формы люциферазы, термостабильность которых в десятки раз превосходит термостабильность исходного фермента. На базе этих мутантов созданы и широко используются высокоактивные и стабильные реагенты для определения АТФ. Даны примеры получения и использования гибридных белков и конъюгатов на основе люциферазы светляков в биоспецифическом анализе различных метаболитов, антигенов, клеток микроорганизмов и ДНК.