ИСТИНА

Неорганическая пирофосфатаза (PPаза, EC 3.6.1.1) – фермент, который катализирует гидролиз пирофосфата до ортофосфата. Пирофосфат (PPi) очень важен в биохимии, так как является побочным продуктом многих биосинтетических процессов, протекающих в клетке, например, PPi образуется при гидролизе АТФ. Таким образом, уменьшение концентрации PPi способно сдвигать равновесие реакций в сторону биосинтеза. Наиболее изученными на настоящий момент являются растворимые пирофосфатазы семейства II (РРазы), четверть из которых содержит регуляторную вставку, состоящую в том числе из двух доменов цистатионин β-синтазы (CBS), назовем их CBS-РРазы. Структурный механизм регуляции CBS-РРазы не известен. Стоит отметить, что CBS домен присутствует и в других белках как эукариот, так и прокариот, в том числе патогенных, и понимание механизма регуляции с помощью этого домена на примере бактериальной пирофосфатазы может помочь в антибактериальных исследованиях. Данная работа посвящена изучению влияния точечных мутаций в CBS1 домене бактериальной пирофосфатазы из Desulfitobacterium hafniense на стабильность и регуляцию этого фермента. Лизин в 95 положении и глутаминовая кислота в 126 положении образуют ионную пару в междимерной области контакта регуляторных вставок и находятся недалеко от регуляторного центра, образованного CBS1- и CBS2-доменами. Предполагается, что эти остатки являются важными для проявления эффектов регуляции CBS-PPазы. Вышеперечисленные остатки были заменены на аланин с помощью сайт-направленного мутагенеза. В ходе работы были определены кинетические и термодинамические параметры диссоциации мутантных форм фермента, параметры связывания с классическим ингибитором (АМР) и активатором (Ap4A) и предложено структурное объяснение наблюдаемым эффектам.