ИСТИНА

Эховирусы и коксакивирусы – (+)РНК-содержащие вирусы, вызывающие различные заболевания человека [1]. Как и другие пикорнавирусы, для трансляции своих мРНК они используют участки внутренней посадки рибосом (IRES) [2]. Однако молекулярные механизмы, лежащие в основе работы этих элементов, изучены недостаточно. Чтобы найти человеческие гены, участвующие в жизненном цикле эховирусов, мы провели нокаутирующий CRISPR/Cas-скрининг на устойчивость культивируемых клеток HEK293T к цитопатической инфекции, вызываемой вирусами Echo6, Echo11, Echo19 и Echo30. Мы идентифицировали MBNL1 (Muscleblind Like Splicing Regulator 1) – ген, кодирующий РНК-связывающий белок, участвующий в альтернативном сплайсинге мРНК, – как необходимый для цитопатической инфекции. Белок MBNL1 является партнером другого регулятора сплайсинга, PTBP1 [3], который хорошо известен как транс-действующий фактор, необходимый для работы IRES (ITAF) ряда пикорнавирусов [2]. Мы предположили, что MBNL1 также является ITAF. Была приготовлена моноклональная клеточная линия с нокаутом (KO) гена MBNL1, которая была инфицирована различными энтеровирусами. Эховирусы Echo6, Echo7, Echo14, Echo19 и Echo30, а также вирусы Коксаки CVA16 и CVA9 показали задержку гибели клеток MBNL1 KO на 3-4 дня по сравнению с клетками HEK293T дикого типа, в то время как CVA9 вообще не оказывал цитопатического действия на клетки KO. Напротив, на динамику гибели клеток, зараженных коксакивирусами CVB3, CVB4 и CVB5 и полиовирусами PV1, PV2 и PV3, отсутствие MBNL1 влияния не оказывало. Значение MBNL1 для IRES-опосредованной трансляции энтеровирусов исследовали с помощью репортерных конструкций в клетках, трансфицированных мРНК, и в бесклеточной системе. Будут представлены данные о его роли в жизненном цикле вирусов. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант № 20-14-00178). ------------- Литература ------------- [1] Lee et al. (2010) J. Clin. Virol. 49, 175-179. [2] Sorokin et al. (2021) Biochemistry (Moscow) 86, 1060–1094. [3] Gooding et al. (2013) Nucleic Acids Res. 41, 4765–4782.