ИСТИНА

Для исследований методом spFRET структурных изменений, происходящих под действием Н1.0 в нуклеосоме и линкерных областях нами созданы конформационно-чувствительные флуоресцентные сенсоры. Для этого синтезировали 603 и 601 нуклеосом-позиционирующие матрицы с введенными в различные положения ДНК парами меток Cy3 и Cy5. При укладке ДНК на октамере гистонов метки располагались на расстояниях, позволяющих регистрировать изменения эффективности FRET при структурных изменениях, происходящих в меченых областях. Комплексообразование нуклеосом с гистоном Н1.0 изучали методом электрофореза в нативном ПААГ. Установлено, что связывание Н1.0 с нуклеосомами происходит в наномолярном диапазоне концентраций в соотношении 1:1. При формировании комплекса с Н1.0 обнаружено сближение линкерных участков ДНК, а также изменение укладки ДНК на октамере гистонов, которое затрагивает как краевые, так и более глубокие (не менее 35 п.н. от входа ДНК в нуклеосому) области нуклеосомной ДНК. С использованием мутантных форм Н1.0 установлено, что С-концевой домен значительно увеличивает аффинность связывания Н1.0 с нуклеосомами и облегчает структурные изменения в коровой области нуклеосом. Предполагается, что конформационные перестройки под действием Н1.0 изменяют участки нуклеосомной ДНК, доступные для взаимодействия с белковыми факторами в хроматосомах по сравнению с нуклеосомами и необходимы для оптимального формирования хроматиновых структур высшего порядка. Работа поддержана проектом РНФ №19-74-30003