ИСТИНА

Данная работа посвящена разработке и анализу струк- туры 3D-модели раковой опухоли, ее сравнению с опухо- лями пациентов с плоскоклеточным раком языка и рото- глотки. 3D-культуры являются перспективными моделями тестирования на этапе доклинических испытаний и долж- ны обладать максимально близкими к условиям in vivo свойствами [1]. Гипотеза заключалась в том, что наиболее подходящими компонентами имитации микроокружения опухоли являются микросферы диаметром 90 и 75 мкм, тогда как использование микросфер диаметром 205 мкм не позволило разработать 3D-модель опухоли. Сфероиды были получены методом культивирования клеток линии HEp-2 (плоскоклеточной карциномы гор- тани) на низкоадгезивной поверхности с добавлением высокопористых микросфер из поли-3-оксибутирата (ПОБ) различного диаметра. При достижении 80% кон- флюэнтности, жизнеспособность клеток оценивалась с помощью окрашивания трипановым синим при помо- щи подсчета в камере Горяева (Freshney). Микросферы из ПОБ использовались в качестве ими- тации микроокружения, в частности, элементов микросо- судистого русла. В качестве источника ПОБ использовался штамм-продуцент Azotobacter chroococcum 7Б [2]. Для получения микросфер диаметром 205, 90 и 75 мкм при- менялся метод “water-in-oil-in-water” (W1/O/W2), позво- ляющий получать микросферы с высокой пористостью (бо- лее 90%). Детекция пролиферативной активности клеток в сфероиде проводилась с помощью МТТ-теста. Анализ морфологии клеток, структуры сфероидов и диаметра ми- кросфер проводился методами СЭМ и конфокальной ми- кроскопии (с использованием флуоресцентных красителей Calcein AM и Hoechst 33342). Полученные сфероиды име- ли характерные для данной 3D-модели зоны, морфология клеток была приближенной к нативной. Оценка корреляции сфероидов с биопсией опухолей пациентов проводилась с помощью иммунофенотипирования. В качестве молеку- лярных мишеней были использованы антитела к биомар- керам р16INK4A и р53 (DO-7). Повышенная экспрессия p16 свидетельствует о ВПЧ-положительном статусе кле- точной линии, преобладание дикого типа p53 — об отсут- ствии быстрого развития опухоли. Полученные результаты иммуногистохимического окрашивания коррелируют с кли- ническими образцами. Включения в модель микросфер диаметром 205 мкм не показало никакого эффекта. Тесты резистентности модели к препаратам доксору- бицин и патлитаксел (таксол) показали, что 3D-модели с микросферами диаметром 90 и 75 мкм проявляют больший уровень лекарственной устойчивости к обоим препаратом, что характерно и для естественных опухоле- вых образований.