ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Блестящая оболочка (zona pellucida) преимплантационных эмбрионов млекопитающих впервые описана в 1827 г. Карлом Бэром под названием Membrana corticalis. Покоящиеся ооциты примордиальных фолликулов не имеют блестящую оболочку. Ооцит образует блестящую оболочку в преантральных фолликулах путём выделения 4 специфических белков: ZP1, ZP2, ZP3, ZP4. Указанные белки ассоциируются с полисахаридными остатками, а также связываются друг с другом, образуя сетевидную структуру: гликопротеиды ZP2 и ZP3, связываясь друг с другом поочередно, образуют фибриллы, а белки ZP1 и ZP4 «сшивают» фибриллы в единый каркас. Толщина блестящей оболочки постовуляторного ооцита (MII) составляет 7-10 мкм, в структуре ее наблюдаются поры, которые в большинстве своём не являются сквозными (вероятно, эти поры – результат присутствия в развивающемся фолликуле выростов клеток гранулёзы, которые образуют клеточные контакты с ооцитом), после овуляции поры постепенно «затягиваются». Несмотря на приписывание блестящей оболочке множества гипотетических функций, достоверно показаны лишь две: 1) блестящая оболочка обеспечивает блок полиспермии при оплодотворении, 2) блестящая оболочка удерживает вместе бластомеры на этапе дробления эмбриона. Для осуществления имплантации эмбрион должен освободиться от блестящей оболочки, чтобы клетки трофоэктодермы вступили в непосредственный контакт с люминальным эпителием эндометрия. Выход эмбриона из блестящей оболочки обозначают термином хэтчинг (от англ. hatching – «вылупление»). В условиях in vitro хэтчинг происходит на 5-6 день развития путём разрыва оболочки и выхода бластоцисты через образовавшуюся щель. In vitro разрыв оболочки связан с двумя факторами: 1) клетки трофэктодермы выделяют протеолитический фермент стрипсин, растворяющий участок зоны пеллюцида, 2) бластоциста увеличивается в размерах и механически разрывает зону пеллюцида. Однако ряд фактов указывает на то, что в условиях in vivo могут действовать дополнительные факторы, приводящие к растворению блестящей оболочки, что способствует более быстрому и эффективному хэтчингу (Montag et al., 2000; Seshagiri et al., 2009). Далеко не все бластоцисты способны осуществить хэтчинг, даже если зона пеллюцида надорвана. Бластоциста затрачивает определенное время (от нескольких часов до суток), чтобы выбраться из надорванной оболочки. Длительный или неудачный хэтчинг может быть фактором, снижающим частоту наступления беременности. Существуют методы вспомогательного хэтчинга – приёмы искусственного разрушения зоны пеллюцида. Наибольшее распространение получили методы лазерного или механического надсечения блестящей оболочки. Реже используется химический хэтчинг – «прожигание» отверстия с помощью кислого раствора Тироде. Перечисленные методы обладают двумя недостатками: 1) оболочка лишь надсекается, и бластоцисте предстоит выйти из оболочки самостоятельно, затрачивая на это время; 2) отверстие в оболочке производят в случайном месте, в то время как при естественном хэтчинге трофэктодерма выделяет стрипсин с абэмбрионального конца, механизм выхода из оболочки предполагает выползание бластоцисты абэмбриональным концом вперёд. Эффективность указанных видов хэтчинга неочевидна, в литературе описаны противоречивые данные относительно их целесообразности (Vajta et al., 2010). Принципиально иным подходом к вспомогательному хэтчингу является полное растворение блестящей оболочки с помощью фермента проназа Е. Преимуществом является то обстоятельство, что бластоциста оказывается полностью свободной от блестящей оболочки и не тратит время на вылупление, не рискует оказаться запертой в оболочке. Недостатком является возможность проводить эту процедуру только на стадии бластоцисты. Растворение блестящей оболочки эмбрионов млекопитающих широко используется в экспериментах на лабораторных животных (Ritchie et al., 2005, Vajta et al., 2010), но использование этого вида хэтчинга в клинической практике описано лишь в нескольких работах. Первая работа, в которой был осуществлён перенос бластоцисты с ферментативно удалённой оболочкой в матку женщине, и получена беременность, была опубликована в 1997 году сингапурскими учёными (Fong et al., 1997). Спустя год та же группа исследователей опубликовала статью, в которой рассказывалось о повышении частоты наступления беременности на 20% после использования проназы (33% в контрольной группе, 53% после удаления оболочки проназой) (Fong et al., 1998). В том же 1998 году выходит статья австралийских авторов (один из них Дэвид Гарднер), в которой они рекомендуют удалять с помощью проназы блестящую оболочку бластоцист перед переносом (Jones et al., 1998). В 2000-м году польская группа учёных сделала вывод о целесообразности использования полного удаления зоны пеллюцида с помощью проназы, так как это повышает частоту наступления беременности (Domitrz et al., 2000). Чешская группа исследователей опубликовала в 2003 г. работу, в которой у бластоцист и морул перед переносом удаляли зону пеллюцида с помощью кислого раствора Тироде, было показано значительное увеличение частоты беременности (31% в контрольной группе, 46% после удаления оболочки) (Jelinkova et al., 2003). Безопасность воздействия проназы на эмбрион человека подтверждается фактом повышения частоты наступления беременности, зафиксированным во всех работах по использованию проназы для хэтчинга, а также специальными исследованиями. Так в 2001 году была опубликована работа, в которой методом электронной микроскопии изучали ультраструктуру клеток бластоцисты человека после обработки проназой (Fong et al., 2001). Показали, что выдерживание в течение 1,5 мин в растворе проназы не приводит к изменениям в клетках бластоцисты. В работе на эмбрионах кошки германская группа исследователей показала, что удаление блестящей оболочки проназой приводит формированию бластоцист с большим количеством клеток, а также к увеличению общего уровня АТФ в клетках (Freistedt et al., 2001). Не смотря на очевидные преимущества (простоту, эффективность, дешевизну), метод полного удаления блестящей оболочки проназой остается малоизвестным в клинической практике и ждёт своего признания.