ИСТИНА

Согласно современным представлениям естественные киллерные клетки (ЕКК) рассматриваются в качестве основных исполнителей – эффекторных клеток (ЭК) системы врожденного противоопухолевого иммунитета. Задачи исследования состояли в изучении чувствительности некоторых монослойных культур опухолевых клеток к цитотоксическому действию свежевыделенных неактивированных ЭК естественного иммунитета беспородных крыс, в определении механизмов киллинга клеток-мишеней (КМ) и влияния противоопухолевых препаратов на активность ЭК. В качестве ЭК были использованы спленоциты крыс. Цитотоксическую активность спленоцитов оценивали с помощью морфометрического анализа, основанного на откреплении от субстрата погибающих клеток.Проведенные исследования показали, что спленоциты крыс вызывают выраженный дозозависимый киллинг клеток монослойных культур гепатом. Наиболее высокой чувствительностью к действию спленоцитов обладают клетки гепатомы НТС, гибель которых при проведении 24-часового теста наблюдается при очень низких отношениях ЭК/КМ – 1:1 и 2:1. На фоне “чувствительных” КМ гепатом клетки эпидермоидной карциномы человека А431 проявляют резистентность к токсическому действию ЭК. Механизм киллинга КМ определяли с помощью мягкой предобработки (фиксации) ЭК 0.5 %-ным раствором параформальдегида (ПФ), в результате которой спленоциты утрачивают способность к секреторному экзоцитозу, но сохраняют поверхностные лиганды, которые при контакте с рецепторами опухолевых клеток индуцируют апоптоз КМ. Гибель клеток гепатом НТС, МН-22а, BWTG3 и HepG2 при инкубации с фиксированными спленоцитами указывает на апоптотический механизм их киллинга, тогда как высокая устойчивость клеток гепатомы Зайдела к действию предобработанных ЭК свидетельствует о секреторном пути лизиса КМ. Однократное внутрибрюшинное введение крысам противоопухолевых препаратов – циклофосфамида (ЦФ) в дозе 100 мг/кг и 5-фторурацила (5-ФУ) в дозе 500 мг/кг – через 2 суток приводит к снижению веса селезенок в среднем в 1.4 раза для обоих препаратов и количества спленоцитов, выделенных из одной селезенки, – в 2.8 и 2.5 раза, соответственно. При этом ЦФ оказывает иммуномодулирующий эффект на активность спленоцитов – ингибирует лизис клеток гепатомы Зайдела, но стимулирует апоптотический механизм киллинга КМ гепатом НТС, МН-22а, BWTG3 и HepG2. На 2-е сутки после введения 5-ФУ наблюдается снижение цитотоксической активности спленоцитов в отношении всех линий гепатом, причем на 7-е сутки ингибирующий эффект препарата усиливается. Проведенное исследование позволяет рекомендовать морфометрический анализ для оценки цитотоксической активности спленоцитов крыс в отношении монослойных линий гепатом в качестве модельной системы in vitro при изучении влияния биологически активных агентов на пути киллинга КМ.