ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Использование высококонцентрированных растворов инертных полимеров (так называемых краудинг агентов) для моделирования условий густонаселенной клеточной среды в in vitro экспериментах позволило установить, что молекулярный краудинг может оказывать заметное влияние на структуру и функции различных белков, а также на процессы их сворачивания – разворачивания. Так, например, наиболее широко освещенным в литературе эффектом молекулярного краудинга является увеличение конформационной стабильности исследуемых белков. По-видимому, это связано с тем, что краудинг агенты занимают значительную часть пространства в растворе, тем самым компактизируя исследуемый белок и смещая равновесие в сторону свернутого состояния. Результаты, представленные в данной работе, показывают, что это не всегда так. Данные полученные для β-лактоглобулина В согласуются с таким предположением. Краудинг агенты, декстран 70 и полиэтиленгликоль 8000 (ПЭГ 8000), используемые в данной работе, оказывают стабилизирующее действие на структуру исследуемого белка, смещая точку, соответствующую середине перехода белка из свернутого в развернутое состояние в сторону больших концентраций используемого денатурата (мочевины) на 0.5 М. В то же время, эти краудинг агенты по-разному влияют на стабильность двух других исследуемых белков. Так добавление декстрана 70 в денатурационную смесь способствует стабилизации нативной структуры β-лактоглобулина А, в то время как ПЭГ 8000 почти никак не влияет на этот процесс. В случае же α-химотрипсина эффекты этих краудинг агентов оказываются даже противоположными друг другу. Так, ПЭГ 8000 незначительно стабилизирует этот белок, а декстран 70 смещает денатурационную кривую на 0.8 М в сторону меньших концентраций мочевины. Кроме того, результаты, полученные для данной группы белков, не подтверждают гипотезу о том, что максимальная эффективность молекулярного краудинга наблюдается для белков и краудинг агентов, обладающих одинаковыми гидродинамическими размерами.