ИСТИНА

Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) - основной опухолевый маркер глиобластомы (ГБ). К белку EGFR как напрямую, так и в составе клеток селектированы аптамеры. Аптамеры представляют собой олигонуклеотиды, высокоаффинно и специфично связывающие целевую мишень. Сравнение отобранных в разных экспериментах аптамеров по литературным данным затрудено. Целью настоящей работы была разработка алгоритма сравнения аптамеров с фокусом на связывании с клетками культур ГБ пациентов. В работе использованы РНК- и ДНК-аптамеры: модифицированные 2’-F-пиримидил-РНК аптамеры ME07 [1], CL04 [2], ДНК-аптамеры U31 и U2[3], GR20 [4], и разработанный в нашей лаборатории ДНК-аптамер Gol1 (нуклеотидная последовательность 5’-GCCGGCATTTTGACGCC-GCCCCGGCTGCTTATGCTCCGGGGCATATGGC-3). Для исследуемых аптамеров с помощью алгоритмов расчета RNAfold предложены возможные вторичные структуры. Методом интерферометрии биослоев показана аффинность исследуемых аптамеров к рекомбинантному внеклеточному домену белка EGFR. Методом проточной цитофлуориметрии на линиях клеток с различной экспрессией EGFR показано специфическое узнавание аптамерами рецептора на клетке. Проведено исследование четырех первичных культур опухоли пациентов с ГБ с различными уровнями экспрессии EGFR. Аптамеры являются эффективным узнающим элементом для исследования представленности EGFR на клетках культур опухоли ГБ человека. Показано, что эффективность узнавания рецептора на клетке для РНК- и ДНК-аптамеров сопоставима. Статус EGFR на опухолевых клетках по-разному влияет на связывание различных аптамеров. Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации по соглашению №075-15-2020-809 (вн. номер 13.1902.21.0030).