ИСТИНА

Введение. В настоящее время в медицине активно развиваются направления, связанные с применением терапевтических мРНК. Наиболее распространенным средством доставки мРНК в клетки являются липосомные наночастицы. Для их формирования трансфицирующий реагент, представляющий собой определённую композицию катионных и вспомогательных липидов, смешивают с доставляемой мРНК. Эффективность трансфекции зависит от химической природы катионного липида, композиции липидной смеси, а также соотношения количеств катионного липида и мРНК. Материалы и методы. m7G-кэпированные полиаденилированные мРНК получали методом in vitro транскрипции, в качестве матрицы использовали ПЦР-продукт с плазмиды, содержащей ген люциферазы. Клетки HEK293T культивировали в планшетном ридере CLARIOstar, активность люциферазы измеряли на протяжении 48 часов после трансфекции. Результаты. Испытаны катионные липиды 2X3, 2X7 и 2S3, содержащие холестерин в качестве гидрофобного хвоста и спермин в качестве положительно заряженной части, в композиции с нейтральным липидом DOPE в различных соотношениях, при варьировании отношения N/P (количества положительных и отрицательных зарядов в трансфицирующей смеси) и среды, в которой формировались наночастицы. Обнаружено, что оптимальным значением N/P является 10, а эффективность трансфекции возрастает с долей нейтрального липида DOPE в смеси вплоть до соотношения 3:1 к катионному липиду. Смеси с липидом 2X7 показали более длительную задержку перед появлением продукта, чем смеси с 2X3 (10 часов и 2 часа соответственно), но более высокую максимальную интенсивность свечения люциферазы, тогда как смеси с 2S3, содержащим дисульфидную связь, показали низкую эффективность трансфекции. Выводы. Для трансфицирующих реагентов на основе катионных липидов 2X3 и 2X7 выявлены зависимости эффективности мРНК-трансфекции от состава липидной смеси, отношения N/P и среды, в которой формируются наночастицы; определена задержка в выходе продукта, зависящая от химической природы катионного липида.