ИСТИНА

Важную роль в защите опухолевой клетки играет молекулярный шаперон Hsp70 (Heat shock protein 70), поддерживающий белки в нативной конформации. В нормальных клетках уровень Hsp70 небольшой, однако в малигнизированных клетках его экспрессия значительно повышается, что является фактором снижения эффективности противоопухолевой терапии. Для того, чтобы усилить действие противоопухолевых агентов, необходимо подавить защитную систему трансформированной клетки, основанную на Hsp70. Многие вещества, ингибирующие Hsp70 и исследуемые в качестве противоопухолевых средств, обладают высокой токсичностью и низкой стабильностью. В то же время пептиды зачастую обладают хорошей пенетрирующей способностью и стабильностью, а также менее токсичны. Поэтому целью нашей работы стал поиск пептидов, способных влиять на его шаперонную активность, и изучение цитотоксического эффекта таких пептидов в комплексе с противоопухолевыми препаратами. Сначала мы провели скрининг пептидов – фрагментов Hsp70 – в целях поиска ингибиторов функции Hsp70 с помощью тестов на узнавание и рефолдинг субстратного белка. Выявленные ингибиторы мы проверяли на способность уменьшать протеолиз Hsp70, указывающую на возможность таких соединений связываться с Hsp70. Далее методами иммунофлуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии мы изучили способность пептидов–ингибиторов Hsp70 проникать во внутриклеточное пространство. Наконец, мы оценили цитотоксический эффект пептидов на опухолевые клетки в сочетании с доксорубицином в опытах по измерению динамического сопротивления и тестах по оценке активности внеклеточной лактатдегидрогеназы. В ходе нашей работы мы выявили пеп-тиды, подавляющие шаперонную функцию Hsp70. Один из этих пептидов, ICit-2, уменьшает эффективность протеолиза Hsp70, что подтверждает его взаимодействие с данным шапероном.Потенциальный терапевтический пептид долженобладать способностью проникать во внутриклеточное пространство. Пенетрирующие свойства пептида ICit-2 мы подтвердили в опытах на клетках эпидермоидной карциномы человека линии А431.Наконец, мы продемонстрировали дозозависимый эффект стимуляции цитотоксических свойств доксоруцбицина данным пептидом. При этом ICit-2 не показал собственной цитотоксичности. Нами был найден пептид, подавляющий активность Hsp70 и усиливающий действие доксорубицина. В отличие от многих других потенциальных терапевтических средств, ингибирующих Hsp70, ICit-2 не обладает собственной токсичностью в рабочих концентрациях, что делает его возможное фармакологическое применение более безопасным. Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ (грант No 14-50-00068).