ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Использование противоопухолевых препаратов-ингибиторов ДНК-топоизомераз, таких как этопозид, в ряде случаев ведет к развитию вторичных лейкозов. Этопозид ингибирует ДНК-топоизомеразу II, что приводит к возникновению двуцепочечных разрывов в ДНК, неправильная репарация которых приводит к образованию хромосомных транс- локаций. При остром миелоидном лейкозе часто наблюдаются перестройки с участием гена AML1 ( RUNX1 ). С помощью флуоресцентной микроскопии, а также программ- ной обработки изображений, можно увидеть процессы, приводящие к развитию вторичных лейкозов, и сделать предположение о механизмах этих процессов. В настоящей работе исследовалось влияние белков Rad51 и Mre11, участвующих в репарации двуцепочечных разрывов ДНК, на динамику концов двуцепочечных разрывов ДНК. Мы обрабатывали клетки суспензионной культуры иммортализованных Т-лимфоцитов Jurkat этопозидом и ингибиторами белков Rad51 (B02) или Mre11 (mirin).После фиксации клеток проводили гибридизацию с флуоресцентными зондами к концам гена AML1, а также зондом против всей территории 21 хромосомы, в которой в норме локализован этот ген. Препараты исследовались на конфокальном микроскопе, и полученные снимки обрабатывались компьютерной программой, детектирующей сигналы и определяющей расстояния между ними. После обработки клеток этопозидом внутри гена AML1 с определенной частотой об- разуется двуцепочечный разрыв. При этом за пределами хромосомной территории чаще локализуются концы разрывов, а не интактные аллели гена. Использование ингибитора Rad51 привело к заметному увеличению числа детектируемых разрывов, что может говорить об участии этого белка в репарации индуцированных этопозидом двуцепочечных разрывов. Ингибирование Mre11 не влияет на частоту детектируемых разрывов. Кроме того, ингибирование указанных белков приводит к снижению доли разрывов, вышедших за пределы территории 21 хромосомы.