ИСТИНА

Когезин – высококонсервативный мультисубъединичный комплекс, одной из функций которого является удерживание сестринских хроматид вместе до их расхождения в митозе. Особенности динамики связывания и характер взаимодействия когезинов с нативным хроматином в контексте сложной архитектуры интерфазного ядра на различных стадиях клеточного цикла до конца не известны. Работа выполнена на культуре мышиных клеток 3Т3. Для описания распределения когезинов по хроматину на разных стадиях клеточного цикла флуоресцентные изображения клеток обработаны программой, написанной на макроязыке в среде ImageJ. Для анализа ултраструктурного распределения когезинов использована микроскопия с суперразрешением. Написан макрос, с помощью которого на изображениях по флуоресцентному сигналу DAPI – красителя, селективно связывающего ДНК – выделяли область ядра. Затем производили разделение ядер по стадиям клеточного цикла. Дифференциацию G/S производили по интегральной интенсивности сигнала репликативной метки, дифференциацию ранняя S/поздняя S производили по стандартному отклонению сигнала репликативной метки, и G1/G2 – по интегральной интенсивности сигнала DAPI. Анализ данных по средней и интегральной интенсивности сигнала Smc3 – субъединицы когезинового комплекса - в разных фазах клеточного цикла показывает увеличение обоих параметров при продвижении по клеточному циклу от G1 к G2. На изображениях, полученных с суперразрешением, в S фазе присутствует как диффузный сигнал Smc3, связывающего хроматин независимо от прохождения репликации, так и колокализующиеся с репликативной меткой, интенсивно окрашиваемые в поздней S фазе, то есть во время репликации гетерохроматина, фокусы Smc3. Связывание хроматина когезинами и репликация практически на разделены во времени, так как яркие фокусы репликативной метки и Smc3 в значительной степени перекрываются. Полученные в этой работе и ранее данные позволяют предположить механизм, согласно которому дополнительное связывание когезинов с хроматином в процессе репликации в местах синтеза ДНК происходит как в эухроматине, так и в гетерохроматине, после чего плотность их посадки на хроматине падает. Дальнейшая когезия сестринских хроматид осуществляется разными механизмами в разных фракциях хроматина: в эухроматине когезию обеспечивает небольшое количество диффузно распределенных когезинов, а в гетерохроматине близкое расположение сестринских хроматид обеспечивается плотной упаковкой хроматина.