ИСТИНА

Тромбоконцентрат – это компонент крови, содержащий в себе высокую концентрацию тромбоцитов, который используется в клинических целях. Растущее число исследований показывает, что при культивировании клеточных культур, альтернативой фетальной бычьей сыворотке (FBS) могут служить тромбоконцентраты человека, содержащие факторы роста из тромбоцитарных гранул [1][2]. В рамках данной работы, была проанализирована эффективность различных тромбоконцентратов, предоставленных станцией переливания крови НМИЦ ДГОИ им. Дм. Рогачева МЗ РФ. Для получения питательной среды использовался лизат тромбоконцентрата от 10 здоровых доноров, полученный 3х-кратной процедурой замораживания/оттаивания (LP1); секрет тромбоцитов, полученный инициированием свертывания плазмы крови в тромбоконцентрате от 10 здоровых доноров с последующим удалением фибриново- тромбоцитарного сгустка (SP1); в качестве контроля использовались низкомолекулярные фракции LP1 и SP1 с массой менее 30 кДа (L30 и S30, соотв.). Полученные добавки в концентрациях от 5 до 10% добавлялись к базальной культуральной среде и тестировались на культурах перевиваемых линии клеток человека – SiHa, MCF7, SH-SY5Y и HEK, в сравнении с FBS. Анализ эффективности сывороток проводился методом подсчета живых и мертвых клеток, окрашенных трипановым синим, в камере Горяева. Морфология клеток оценивалась микроскопией фазового контраста. Количество выросших клеток различалось в зависимости от используемой сыворотки и превышало количество клеток, выросших на FBS практически в 2 раза, при использовании LPl и SPl, при этом наибольшее число клеток наблюдалось в результате использования SPl. Добавки L30 и S30 поддерживали рост клеток на уровне базальной среды. При наблюдении за культурами клеток SiHa, MCF7 и HEK не было обнаружено изменений формы и размера в сравнении с FBS. SH-SY5Y спустя 2 дня культивирования при использовании FBS, а так же фракции L30 и S30, имели нейроноподобную форму, что может свидетельствовать об их дифференцировке при недостаточном количестве факторов роста либо белков, но при использовании LPl и SPl они имели более округлую форму, которая, тоже спустя 2 дня становилась более нейронообразной. В результате, можно сделать вывод, что метод приготовления SPl сохраняет в составе сыворотки наибольшее количество факторов и белков, необходимых для роста клеток. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда No 23-45-10039, https://rscf.ru/project/23-45-10039/ Литература 1. Bianchetti A. et al. A blood bank standardized production of human platelet lysate for mesenchymal stromal cell expansion: proteomic characterization and biological effects //Frontiers in Cell and Developmental Biology. – 2021. – Т. 9. – С. 650490. 2. Muraglia A. et al. Biological activity of a standardized freeze-dried platelet derivative to be used as cell culture medium supplement //Platelets. – 2014. – Т. 25. – No. 3. – С. 211-220.