ИСТИНА

Многим тяжелым заболеваниям, таким как болезнь Альцгеймера, Паркинсона, прионные болезни и другие сопутствует образование и накопление в организме упорядоченных нерастворимых белковых агрегатов, называемых амилоидными фибриллами. Исследования последних лет показали различия в структуре амилоидных фибрилл на основе различных белков и даже на основе одного и того же белка. Структурные различия амилоидных фибрилл могут лежать в основе природной вариабельности различных амилоидозов. Целью настоящей работы стало исследование структурных различий амилоидных фибрилл на основе лизоцима, бета-2-микроглобулина и альфа-синуклеина, накопление которых сопутствует системному лизоцимовому амилоидозу, гемодиализному амилоидозу и болезни Паркинсона, соответсвенно. Для диагностики образования и исследования особенностей структуры амилоидных фибрилл широко и эффективно применяется флуоресцентный зонд тиофлавин Т (ThT). Уникальность ThT заключается в том, что данный краситель специфически взаимодействует с амилоидными фибриллами. При этом, квантовый выход его флуоресценции, который в водном растворе очень мал, при встраивании красителя в амилоидные фибриллы может возрастать в десятки тысяч раз. В настоящей работе было изучено взаимодействие ThT с амилоидными фибриллами на основе лизоцима, полученными при различных условиях фибриллогенеза, альфа-синуклеина, а также бета-2-микроглобулина и его укороченных форм. С использованием специально разработанного подхода, основанного на спектроскопии растворов, подготовленных методом равновесного микродиализа, были определены параметры связывания (константы связывания и количество мест связывания) красителя с амилоидными фибриллами, а также рассчитаны характеристики связанного с фибриллами красителя (квантовый выход флуоресценции и коэффициент молярной экстинкции). Кроме того, структура амилоидных фибрилл была изучена с использованием методов КД-спектроскопии и электронной микроскопии. Результаты, полученные в настоящей работе, свидетельствуют о различии структуры исследуемых амилоидных фибрилл.