ИСТИНА

Накопление в тканях и органах организма амилоидных фибрилл, сопутствует многим тяжелым заболеваниям, таким как болезнь Альцгеймера, Паркинсона, прионные болезни и др. Исследования последних лет показали, что многие белки и пептиды, не связанные с болезнями, так же способны образовывать фибриллы. В связи с этим исследование структуры, свойств, механизмов образования и деградации амилоидных фибрилл является важной задачей при поиске диагностических и терапевтических агентов, а также для решения фундаментальной проблемы фолдинга белков. Для диагностики образования и исследования структуры амилоидных фибрилл in vitro эффективно используется флуоресцентный зонд тиофлавин Т (ThT), изменяющий свои фотофизические свойства при инкорпорировании в фибриллы. В настоящей работе с использованием ThT, а также его аналога DMASEBT, полученного при сотрудничестве с Кафедрой лазерной физики и оптики Белорусского государственного университета, спектры поглощения и флуоресценции которого приближены к окну прозрачности биологических тканей, были исследованы амилоидные фибриллы на основе инсулина. Амилоидные фибриллы, полученные путем инкубирования белка в течение суток при температуре 37°С в буферном растворе с pH=2, были охарактеризованы с использованием электронной микроскопии, абсорбционной и собственной УФ-спектроскопии, а также метода кругового дихроизма. С использованием специально разработанного подхода, основанного на абсорбционной и флуоресцентной спектроскопии растворов, подготовленных методом равновесного микродиализа, определены параметры связывания ThT и DMASEBT с амилоидными фибриллами инсулина (количество мод связывания, стехиометрия и аффинность взаимодействия) и характеристики связанных с фибриллами красителей (коэффициенты молярной экстинкции, квантовые выходы флуоресценции и др.). Результаты настоящей работы являются важным шагом в исследовании структуры амилоидных фибрилл, а также возможности использования флуоресцентных зондов для диагностики их образования in vivo.