ИСТИНА

Прионные болезни относятся к классу нейродегенеративных заболеваний и, в большинстве случаев, приводят к летальному исходу. Как и другие заболевания, связанные с нарушением фолдинга белков центральной нервной системы, прионные болезни проявляются быстро прогрессирующим расстройством рефлексов конечностей, гипотензией, дизартрией, нарушением глотания, атаксией, снижением функциональной активности головного мозга и деменцией. Одним из наиболее изученных прионов на сегодняшний день является [PSI+], который возникает в результате прионизации дрожжевого белка Sup35p. Несмотря на длительную историю исследований, многие вопросы, касающиеся структурной организации фибрилл на основе Sup35p, остаются неизученными. Оценка параметров связывания с этими амилоидными фибриллами специфического флуоресцентного зонда тиофлавина T (ThT) может внести значительный вклад в эту область. В настоящей работе для решения этой задачи была использована абсорбционная спектроскопия растворов, подготовленных методом равновесного микродиализа. Было показано существование двух мод связывания красителя с фибриллами с существенно различающимися аффиннностью и стехиометрией связывания, а также квантовым выходом флуоресценции связанного красителя. Нужно отметить, что применение предложенной методики является ключевым моментом, так как флуоресцентный подход, широко используемый для определения параметров связывания, не может быть применен в случае существования нескольких мод связывания, а значит, не может дать корректных результатов при изучении взаимодействия ThT с фибриллами на основе Sup35p. Существование одной из обнаруженных мод связывания может быть обусловлено встраиванием красителя в бороздки вдоль оси волокна фибриллы перпендикулярно β-листам. Наличие еще одного типа связывания с более высокой аффинностью, меньшим числом мест связывания и более высоким квантовым выходом флуоресценции связанного ThT может быть обусловлено локализацией молекул красителя в участках кластеризации фибрилл, наличие которых было показано с использованием метода электронной микроскопии. Нужно отметить, что при заболеваниях, сопровождающихся различного рода амилоидозами (в т.ч. при прионных болезнях), наблюдается образование нерастворимых депозитов, оседающих (откладывающихся) в органах и тканях. Этот факт имеет существенное значение в связи с широким использованием ThT в качестве диагностического, а в перспективе, и терапевтического агента при таких заболеваниях. Можно предположить, что in vivo будет преобладать взаимодействие ThT именно с кластерами амилоидных фибрилл, а значит при проведении экспериментов in vitro характеристике этого типа взаимодействия должно быть уделено особое внимание.