ИСТИНА

Многим тяжелым заболеваниям, таким как болезнь Альцгеймера, Паркинсона, прионные болезни, сахарный диабет второго типа и др., сопутствует образование и накопление в тканях и органах амилоидных фибрилл - упорядоченных белковых агрегатов, богатых бета-складчатыми структурами. Исследования последних лет показали, что, не смотря на сходство общей архитектуры, амилоидные фибриллы, образованные на основе различных амилодогенных белков и даже на основе одного и того же белка, могут иметь существенные различия. Изучение структуры и свойств амилоидных фибрилл является актуальной задачей при поиске агентов для диагностики и терапии амилоидозов, а также для решения фундаментальной проблемы фолдинга белков. В настоящей работе амилоидные фибриллы на основе альфа-синуклеина, бета-2-микроглоубулина и его укороченных форм, а также на основе лизоцима, полученные при различных условиях фибриллогенеза (pH=2 и pH=7), были охарактеризованы с использованием методов электронной микроскопии, флуоресцентной спектроскопии, а также метода кругового дихроизма. С использованием специального подхода, основанного на подготовке растворов методом разновесного микродиализа, было исследовано взаимодействие с исследуемыми фибриллами специфического флуоресцентного зонда тиофлавина Т (ThT). Для амилоидных фибрилл на основе лизоцима и альфа-синуклеина показано существование двух мод связывания ThT, в то время как для амилоидных фибрилл бета-2-микроглобулина и его укороченных форм, обнаружена только одна мода связывания красителя. Для каждой из обнаруженных мод были определены параметры связывания ThT (константа связывания и количество мест связывания), а также фотофизические характеристики красителя (квантовый выход флуоресценции, коэффициент молярной экстинкции, время жизни флуоресценции), инкорпорированного в амилоидные фибриллы. Полученные результаты позволили сделать заключение о существенных различиях в структуре исследуемых амилиодных фибрилл.