ИСТИНА

Эндогенный ингибитор РС гепатопанкреаса камчатского краба Paralithodes camchaticus подавляет активность сериновых протеиназ (трипсина, химотрипсина, субтилизина, тромбина, сериновой коллагенолитической протеиназы камчатского краба) и папаина, но не действует на плазмин и глутамилэндопептидазу. Установлена нуклеотидная и аминокислотная последовательности проингибитора РС камчатского краба. Анализ кДНК гена и транслированной аминокислотной последовательности показал, что ингибитор содержит 402 аминокислотных остатка, молекулярная масса 44,5 кДа, изоэлектрическая точка 9,14. Сравнение аминокислотных последовательностей ингибитора РС краба с ингибиторами, относящимися к семейству серпинов из наиболее близких представителей семейства членистоногих, позволяет отнести эндогенный ингибитор камчатского краба к семейству серпинов. Ингибитор существенно замедляет распластывание клеток HeLa в системе in vitro, эффект дозозависимый. Обнаружено, что в процессе роста клетки секретируют протеиназы активные по субстратам трипсино- и химотрипсино-подобных протеиназ. Внеклеточная протеиназа была выделена из культуральной жидкости клеток НеLa c помощью аффинного сорбента бацитрацин-сефарозы со степенью очистки 10 раз и количественным выходом (субстрат Z-Ala-Leu-Arg-pNA). Протеиназа активируется дитиотрейтолом и цистеином, полностью ингибируется ацетамидом, Е-64, HgCl2, а также теряет активность в присутствии ингибитора РС камчатского краба. Лучшими субстратами являются Gly-Arg-pNA и Z-Phe-Аrg-pNA. Эти свойства наиболее соответствуют свойствам цистеиновых катепсинов В и L, широко распространенных в гепатоцитах, макрофагах и различных тканях человека. Известно, что цистеиновые катепсины активируются в процессах, связанных с ангиогенезом, пролиферацией, апоптозом и инвазией опухолей. Катепсины могут экспрессироваться на клеточной поверхности и секретироваться во внеклеточное пространство. Возможно секреторные катепсины клеток HeLa, в первую очередь подвергаются действию ингибитора РС камчатского краба.