ИСТИНА

Фенольные биосенсоры на основе тирозиназы благодаря высокой чувствительности, которая достигается при анализе фенола, могут использоваться для определения активности ферментов, использующих производные фенола в качестве субстратов, в том числе в сильно разбавленных образцах биологических жидкостей и тканей при минимальной интерференции. Анализ активности нагазы в коровьем молоке позволяет выявлять заболевание маститом у коров на ранних стадиях. При этом заболевании концентрация нагазы в молоке значительно повышается вследствие попадания фермента из крови в молоко через пораженные капилляры. Определение низких концентраций нагазы позволит диагностировать мастит на ранней стадии, что является залогом его успешного лечения. Цель данной работы заключается в разработке биосенсорного метода анализа активности нагазы в коровьем молоке по субстрату фенил-N-ацетил-β-D-глюкозаминиду (PNAG) и детекции выделяющегося фенола тирозиназным биосенсором. Тирозиназный биосенсор создавали путем последовательной адсорбции (метод слой-за-слоем) полидиметилдиаллиламмоний хлорида и тирозиназы на поверхность планарного графитового электрода, формируемого методом трафаретной печати. Тирозиназный биосенсор имел следующие характеристики: чувствительность 0.9 А(М×см2), линейный диапазон 1Е-08 М - 1Е-05 М, операционная стабильность 0.6 % снижения отклика за одно измерение, предел детекции по фенолу 6нМ. Проведена адаптация рассматриваемой биоаналитической системы по детекции фенола в молоке (выбор рабочего потенциала, рН измерения, пробоподготовка, степень разбавления пробы, эффекты матрицы и проч.). В выбранных условиях получена калибровочная зависимость по коммерческому препарату нагазы, оценена чувствительность определения нагазы в чистых средах и в присутствии молока.