ИСТИНА

Пикорнавирусы – это (+)РНК-содержащие вирусы, вызывающие различные заболевания человека и животных. Для трансляции своих мРНК они используют участки внутренней посадки рибосом (IRES). Молекулярные механизмы, лежащие в основе работы этих элементов, и белки клетки-хозяина, участвующие в этих механизмах, изучены недостаточно. Мы провели нокаутирующие CRISPR/Cas-скрининги на устойчивость культивируемых клеток HEK293T к цитопатической инфекции, вызываемой несколькими представителями пикоравирусов из разных групп: в частности, вирусом энцефаломиокардита (EMCV, кардиовирус), эховирусами и вирусами Коксаки (энтеровирусы ECV, CVA и CVB). Среди идентифицированных «хитов», необходимых для цитопатической инфекции, обнаружились гены РНК-связывающих белков: PA2G4 в случае EMCV и MBNL1 в случае ряда ECV и CVA. Белок PA2G4 был известен ранее как ITAF45 – фактор, необходимый для работы IRES-элемента вируса ящура в системе сборки 48S инициаторных комплексов из очищенных компонентов, однако для работы IRES-элемента вируса EMCV в этой системе он не требовался. Роль белка MBNL1 в вирусных инфекциях ранее не была показана, однако он является партнёром PTBP1, регулятора альтернативного сплайсинга, который известен как ITAF, необходимый для работы IRES-элементов ряда пикорнавирусов. Клетки, нокаутные по гену PA2G4, продемонстрировали полную устойчивость к заражению EMCV, а нокауты по MBNL1 оказались гораздо устойчивее к ECV6, ECV11, CVA9 и ряду других, но при заражении CVB3, CVB5 и полиовирусами PV1, PV2 и PV3 погибали так же быстро, как и клетки дикого типа. Устойчивые к вирусам клетки гораздо медленнее накапливали вирусные РНК и белки, подтверждая отсутствие продуктивной инфекции. Изучение роли белков PA2G4 и MBNL1 в IRES-зависимой трансляции, проведённое в культивируемых клетках дикого типа и в нокаутных клетках методом трансфекции репортерными мРНК, а также в бесклеточных трансляционных системах, изготовленных из этих клеток, показало сложный характер зависимости неканонической трансляции от присутствия данных белков. Работа поддержана грантом РНФ 23-14-00218.