ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ИНХС РАН |
||
Согласно общепринятой модели, процесс эукариотической инициации трансляции включает связывание кэппированного 5' конца мРНК с последующим направленным поиском инициаторного кодона (сканированием). Ранее нами было показано, что продолжительность процесса инициации линейно зависит от длины 5'НТО мРНК. В этой работе мы исследовали зависимость времени инициации от стабильности вторичной структуры 5'НТО. В неструктурированную область 5'НТО мРНК ретротранспазона L1 человека были вставлены взаимно комплиментарные нуклеотидные последовательности, способные образовывать шпильки разной стабильности. Было обнаружено, что хотя включение шпилек с высокой энергией плавления (~50 kcal/mol) существенно уменьшает скорость накопления синтезированного белка, т.е. эффективность инициации, средняя продолжительность процесса инициации остается во всех случаях практически неизменной. Был сделан вывод, что вторичная структура мРНК оказывает влияние не на скорость, как считалось ранее, а лишь на процессивность сканирования. Чтобы показать, что наблюдаемые эффекты определяются именно сканированием 5'НТО при кэп-зависимой инициации, мы использовали альтернативный механизм внутренней инициации, вставляя в природные лидеры разной длины специфическую IRES последовательность из РНК вируса энцефаломиокардита на одинаковом расстоянии от инициаторного кодона. В этом случае время инициации оставалось неизменным при разной суммарной длине 5'НТО. Полученные данные позволяют заключить, что линейная зависимость времени инициации от длины 5'НТО определяется именно процессом сканирования, средняя скорость которого слабо зависит от вторичной структуры лидера.