ИСТИНА

Толл-подобные рецепторы (Toll-like receptor, TLR) – клеточные рецепторы I типа, играющие важную роль в работе как врожденного, так и приобретенного иммунитета. В их состав входит внеклеточный домен (ECD), задействованный в узнавании молекулярных паттернов – структурных компонентов различных патогенов (PAMP), единственный трансмембранный (TM) домен и внутриклеточный TIR домен, вовлеченный в процесс передачи сигнала внутрь клетки. Рецепторы TLR образуют гомо-/гетеродимерные сигнальные комплексы с PAMP, что запускает сигнальный каскад реакций, воспалительный процесс и активацию иммунного ответа. Детальное изучение механизмов работы TLR важно с фундаментальной, медицинской и биологической точек зрения. Тем не менее, структурно-функциональные особенности этих полноразмерных рецепторов на молекулярном уровне полностью не изучены. Определение ЯМР структуры полноразмерных рецепторов/их комплексов осложнено из-за их размеров, а так же из-за трудностей биохимического получения достаточных количеств TLR в нативной конформации в средах, моделирующих мембрану. В связи с этим при исследовании структуры и функции полноразмерных рецепторов чаще всего встречается подход, предполагающий изучение их фрагментов. В данном исследовании разработаны подходы, позволяющие экспрессировать гены отдельных доменов TLR4 (TIR и TM-TIR) в количествах, необходимых для структурного анализа методом спектроскопии ЯМР высокого разрешения. Для внутриклеточного фрагмента TLR4 и его связки с ТМ доменом рецептора с учетом склонности к образованию высокомолекулярных комплексов разработаны протоколы очистки и рефолдинга. Получены необходимые количества целевых белковых фрагментов и проведены первые ЯМР-эксперименты. Работа поддержана Российским научным фондом (грант № 14-14-00573).