ИСТИНА

Статус метилирования остатков цитозина по 5 положению в CpG-островке гена O6-метилгуанин-метилтрансферазы (MGMT) в глиобластомах является общепризнанным молекулярным биомеркером для противоопухолевой терапии [1]. Технологии одномолекулярного нанопорового секвенирования позволяют напрямую «считать» информацию о распределении метилированных оснований в геноме. Методом нанопорового секвенирования изучен статус метилирования 97 клинически значимых CpG-сайтов в промоторе MGMT человека. Показано, что гуанин-богатые области, формирующие G-квадруплексы (G4), гипометилируются, а комплементарные им цитозин-богатые последовательности, напротив, метилируются ДНК-метилтрансферазой Dnmt3a с повышенной эффективностью. Точность определения модифицированных оснований в G4-формирующих областях значительно снижалась по сравнению с окружающими последовательностями. Способность гипометилированных последовательностей промотора MGMT формировать G4-структуры была установлена алгоритмом G4Hunter [2] и подтверждена методом кругового дихроизма. Методом биослойной интерферометрии показано, что одноцепочечная гуанин-богатая ДНК-последовательность из промотора гена MGMT, формирующая G4, связывается с Dnmt3a-CD на порядок прочнее комплементарной ей цитозин-богатой цепи (Kd 3·10-8 и 3·10-7М, соответственно), что свидетельствует о высоком сродстве Dnmt3a-CD к G4. Связываясь с Dnmt3a, G4-формирующие олигонуклеотиды из MGMT эффективно ингибировали реакцию метилирования (IC50 6·10-7М). Полученные данные свидетельствуют о роли G4-формирующих последовательностей в метилировании промотора MGMT и подчеркивают сложности секвенирования гуанин-богатых областей методом нанопорового секвенирования. 1. Weller, M., Stupp, R., Reifenberger, G. et al. MGMT promoter methylation in malignant gliomas: ready for personalized medicine?. Nat Rev Neurol 6, 39–51 (2010) 2. Brázda, V. et al. (2019). G4Hunter web application: a web server for G-quadruplex prediction. Bioinformatics 35, 3493–3495 Работа выполнена при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации по соглашению N 075-15-2021-1343.