ИСТИНА

Традиционный биосенсорный анализ токсичных фосфорорганических соединений карбаматов включает в себя стадию инкубации анализируемого раствора с ацетил(бутирил)холинэстеразой и определение остаточной активности фермента по ацетил(бутирил)холину при помощи холиноксидазного биосенсора. Чувствительность и стабильность работы холиноксидазного биосенсора играет одну из основных ролей в данном анализе. В лаборатории Экобиокатализа Химического факультета МГУ был разработан автоматический проточно-инжекционный анализатор нейротоксинов на основе холиноксидазных мембранных электродов для определения ингибиторов холинэстераз. Но поскольку операционная стабильность такого сенсора всего две недели, данная конструкция требует умелого обращения и не может быть признана технологичной. Поэтому целью данной работы является предложение и разработка двух альтернативных способов решения описанной проблемы: 1) включение холиноксидазы (ХО) в состав набора сухих реагентов, используемого для проведения анализа ингибиторов, путем стабилизации ХО за счет подобранных добавок и лиофильного высушивания, проводимого на стадии приготовления набора. Для данной системы были исследованы кинетические параметры окисления холина холиноксидазой. Было оптимизировано содержание ХО и бутирилхолиноксидазы (БХЭ) в системе, что позволило уменьшить расход БХЭ в 10 раз. С использованием полученного набора проведен ингибиторный анализ диизопропилфторфосфата и карбарила. 2) замена холиноксидазной мембраны на холиноксидазный электрод, приготовленный методом самоорганизации полиэлектролитов (технология "слой-за-слоем"). Были изучены величины и стабильности откликов системы от условий модификации поверхности электрода, типа конструкции электрода, типа полиэлектролита, подобраны оптимальная концентрация холиноксидазы и условия ее нанесения.