ИСТИНА

Методом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) в сочетании с измерениями температурных зависимостей светорассеяния проведены исследования тепловой денатурации актиновых филаментов (F-актина) и вызываемой ею агрегации белка в присутствии и в отсутствие малых белков теплового шока (sHsp). Показано, что при нагревании sHsp эффективно защищают F-актин от агрегации, но при этом не оказывают заметного влияния на тепловую денатурацию белка. Сходные результаты были получены и в случае миозина: показано, что в условиях теплового шока (при 43оС) sHsp эффективно защищают изолированные миозиновые головки (субфрагмент 1 миозина, S1) от агрегации, но не оказывают влияния ни на тепловую денатурацию S1, ни на инактивацию миозиновой АТРазы. Таким образом, удалось выяснить, что sHsp влияют лишь на агрегацию белка, вызываемую его тепловой денатурацией, но не оказывают влияния на сам процесс денатурации. Методом соосаждения показано, что sHsp связываются с актином и с S1 лишь в процессе тепловой денатурации этих белков, защищая их от агрегации, но не взаимодействуют с нативными белками. Установлено, что защита F-актина от агрегации осуществляется путем образования небольших, стабильных и хорошо растворимых комплексов sHsp с денатурированным актином. При совместном использовании методов ДСК, динамического лазерного светорассеяния, седиментационного анализа, гель-хроматографии и электронной микроскопии определены физико-химические характеристики таких комплексов, их приблизительные размеры (гидродинамический радиус ~16 нм) и молярное отношение актин/sHsp в этих комплексах, которое в условиях насыщения составляет ~1:1. Полученные данные позволяют описать механизм защиты актинового цитоскелета от аморфной агрегации, приводящей к гибели клеток при различных неблагоприятных воздействиях.