ИСТИНА

Согласно иерархической модели клеточной организации опухолей толь-ко небольшая субпопуляция клеток обладает опухолеинициирующим потен-циалом, экспрессирует маркеры стволовых клеток соответствующей ткани, обладает пластичностью и обеспечивает лекарственную резистентность опу-холи. В отношении этой особой субпопуляции клеток в литературе исполь-зуют такие взаимозаменяемые термины как “опухолевые стволовые клетки (ОСК)” и “опухолеинициирующие клетки (ОИК)”. Предполагается, что ОИК c миграторным фенотипом обеспечивают диссеминацию злокачественных клеток в организме и образование метастазов. Существует ряд подходов для получения клеточных популяций, обогащенных ОСК, в числе которых – тест на образование голоклонов при культивировании. Согласно имеющимся дан-ным, голоклоны образуются из клоногенных ОСК и содержат ОИК, тогда как мероклоны – из прогениторных клеток ранней стадии дифференцировки. Гепатома Зайдела, индуцированная у крыс 4-диметиламиноазобензолом более 50 лет назад, прошла основные этапы опухолевой прогрессии в рамках первичной солидной опухоли (Зайдела, 1963). В результате спонтанного раз-рыва капсулы первичной опухоли в брюшную полость крыс отделились кле-точные островки, давшие начало асцитной форме опухоли – промежуточно-му этапу на пути диссеминации опухолевых клеток в паратрахеальные лим-фатические узлы. С целью изучения биологии клеток метастатической опухо-ли мы эксплантировали клетки гепатомы из асцитической жидкости в культу-ру in vitro и селектировали монослойную линию клеток. Дальнейшее клони-рование клеток этой линии с помощью метода предельных разведений позво-лило нам получить сублинии, которые произошли из голо- и мероклонов и принципиально различаются по клеточному составу, морфологии, морфомет-рическим показателям и миграционным свойствам клеток. Мы показали, что введение беспородным крысам клеток голоклональных сублиний гепатомы Зайдела приводит к развитию асцитной опухоли и гибели примерно 50 % животных. Впервые определили, что эти клетки имеют фиб-робластоподобную морфологию, формируют рыхлый монослой без плотных межклеточных контактов и активно внедряются в свободное пространство в тесте на “зарастание раны”, используя амебоидный тип индивидуальной ми-грации; на их клеточной поверхности мы выявили N-кадхерин – маркер ме-зенхимных клеток, и в наружной мембране и цитоплазме хеморецептор CXCR4 – маркер ОСК и мигрирующих клеток. Напротив, клетки мерокло-нальных сублиний не индуцируют асцитной гепатомы, имеют преимуще-ственно эпителиоподобную морфологию, формируют плотный монослой и используют преимущественно коллективный способ миграции. С помощью метода непрямой иммунофлуоресценции мы выявили у кле-ток гепатомы Зайдела маркеры стволовых/прогениторных клеток печени Ep-CAM и Ov6, маркер эпителиально-мезенхимного перехода Snail1; обнаружи-ли ядерную локализацию цитоплазматического домена EpCAM – EpICD, ко-торая указывает на активацию EpCAM-сигнального пути и метастатическую природу опухоли. Предварительные данные свидетельствуют об экспрессии и ядерной локализации в клетках гепатомы транскрипционного фактора Oct3/4 – маркера “стволовости” и плюрипотентности клеток. Таким образом, мы впервые клонировали и охарактеризовали сублинии голоклональных ОИК с миграторным фенотипом. Считаем, что выявление отличий в геноме, транскриптоме, протеоме и метаболоме у клеток голокло-нальных и мероклональных сублиний гепатомы Зайдела – перспективный путь для определения важнейших молекулярных признаков метастатических ОИК и мишеней для направленного противоопухолевого воздействия.