ИСТИНА

Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) в настоящее время представляют большой интерес в области регенеративной медицины, так как обладают уникальными свойствами – плюрипотентностью и способностью к самообновлению. Однако на сегодняшний день в процессе продолжительной экспансии ЭСК подвергаются спонтанной дифференцировке, что связано с изменениями в кариотипе культивируемых клеток. Поиск из числа малых молекул, которые могли бы дополнить протокол культивирования ЭСК в качестве компонентов, поддерживающих свойства плюрипотентности и самообновления, привел к исследованию действия ресвератрола на ЭСК мыши (мЭСК). На различных модельных объектах показаны противовоспалительное, антидиабетическое, антивирусное, антибактериальное и противоопухолевые свойства ресвератрола. В настоящее время уже синтезированы различные химические производные ресвератрола для более эффективного терапевтического воздействия. Таким образом, положительное влияние ресвератрола на большое число клеточных процессов позволило нам предположить, что указанное соединение может быть также полезно в положительной регуляции фундаментальных свойств ЭСК – самообновления и плюрипотентности. Количественная ОТ-ПЦР и вестерн блотинг выявили повышенную экспрессию коровых маркеров плюрипотентности Oct3/4, Sox2, Nanog, Klf4, а также esrrb и prdm14 в мЭСК при действии ресвератрола. Анализ экспресссии поверхностного маркера SSEA1, ассоциированного с плюрипотентностью показал up-регуляцию этого антигена в ресвератрол-обработанных мЭСК. Наблюдаемое окрашивание на щелочную фосфатазу мЭСК, культивируемых в присутствии ресвератрола, подтвердило положительное влияние ресвератрола на плюрипотентность клеток. Кроме того, мы обратили внимание на формирование более плотных колоний мЭСК при действии ресвератрола. Исследование влияния ресвератрола на структуру клеточных контактов, образованных N-кадгерином и β-катенином, выявило повышенную экспрессию этих белков на мембранах клеток. Таким образом, было показано, что ресвератрол положительно модулирует плюрипотентные свойства мЭСК, поддерживая их недифференцированное состояние. Исследование механизмов, обуславливающих наблюдаемые эффекты ресвератрола на мЭСК, выявило вовлеченность процесса аутофагии. Было показано, что образование аутофагосомных вакуолей увеличивается при действии ресвератрола уже в течение суток. Активация аутофагии подтвердилась повышенной экспрессией второй формы белка LC3-II, компонентом аутофагосомной мембраны, аккумуляцией Atg5/Atg12 и снижением количества белка p62/SQSTM1 в клетках, обработанных ресвератролом, Мы оценили mTOR-зависимый сигнальный путь, активация которого отрицательно регулирует аутофагию, и обнаружили, что добавление ресвератрола к мЭСК приводило к снижению активности этой, а также ее мишеней p70/80S6, S6K и 4E-BP1. Киназа mTOR регулирует аутофагию через ингибирующее фосфорилирование ULK1, а ингибирование mTOR снижает ингибирующий уровень фосфорилирования ULK1 и увеличивает аутофагию. Соответственно, мы проанализировали уровень фосфорилирования ULK1 по ключевым а.к. остаткам, а также уровень активации киназы AMPK, которая усиливает аутофагию в ответ на истощение энергии и показали, что ресвератрол индуцирует аутофагию в мЭСК через путь mTOR-ULK1, который включает в себя ингибирование киназы mTOR. Соответственно, можно предположить, что положительное влияние ресвератрола на плюрипотентность и самообновление мЭСК может быть обусловлено активацией аутофагии в том числе.