ИСТИНА

В настоящее время для визуализации в клетку могут быть введены как прижизненные красители, так и наночастицы различного происхождения. Суперпарамагнитные наночастицы оксида железа (Superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPIONs) благодаря их уникальным свойствам и их очевидной безопасности для человека используют для диагностики с помощью метода МРТ [1,2]. В ряде работ показано, что наночастицы, введенные в клетку в определенной концентрации, не вызывают повреждения и не оказывают негативного влияния на пролиферативные и дифференцировочные свойства клеток, однако долгосрочные эффекты SPIONs продолжают исследоваться. Целью работы являлась оценка эффективности и характера включения клетками SPIONs с помощью различных методов микроскопии. Мезенхимальные стромальные клетки костного мозга кролика инкубировали с наночастицами (SPIONs) с концентрацией 150 мкг/мл в течение различных сроков (6, 12 и 24 часа). Для оценки эффективности включения наночастиц клетками использовали метод непрямой иммунофлуоресценции, ядра клеток окрашивали DAPI (4′,6-diamidino-2-phenylindole). Идентификацию окрашенных клеток проводили с помощью конфокального микроскопа Leica TCS SL (Zeiss, Германия). Для возбуждения флуоресценции использовали аргоновый лазер с длиной волны 405 нм, для выявления наночастиц использовали HeNe –лазер с длиной волны 543 нм. Применяли раздельное сканирование для каждого сигнала. Совмещение двух сигналов проводили с помощью компьютерной программы Leica Confocal Software (рис.1). Рис.1. Иммунофлуоресцентный анализ эффективности включения SPIONs клетками: DAPI – синий; наночастицы – красный. Scale bar 100 µm. Характер включения клетками наночастиц оценивали на ультраструктурном уровне с помощью электронного микроскопа Libra 120. Ультраструктурная организация клеток, инкубированных с SPIONs, свидетельствует о сохранении их жизнеспособности и функциональной активности (рис.2). Рис.2. Анализ включения SPIONs клетками с помощью метода трансмиссионной электронной микроскопии. Scale bar 1 µm. Выводы: Максимальный уровень включения клетками SPIONs происходил после 24 часов инкубирования. Наночастицы были выявлены в цитоплазме в составе гетерогенных эндосом и не оказывали токсического воздействия на клетки.