ИСТИНА

Дестабилаза-лизоцим (Дест-Лиз) секрета слюнных клеток медицинской пиявки – полифункциональный фермент, обладающий эндо-ε-(γ-Glu)-Lys-изопептидазной, лизоцимной и антимикробной функциями. Нами была установлена его полная аминокислотная последовательность и идентифицированы три гена, кодирующие изоформы фермента Действие фермента направлено на растворение стабилизиро- ванного фибрина и расщепление продукта его деградации – Д-димера в процессе тромболизиса, где реализуется изопептидазная функция Дест-Лиз. Лизоцимная функция проявляется в способности фермента разрушать клеточные стенки M. lysodeikticus и гидролизовать гексамер N-ацетил-глюкозамина. Нами разработан метод получения высокоочищенного рекомбинантного препарата рек. Дест-Лиз из «телец включения», образующихся в клетках E.coli,при экспрессии вектора pQE30, содержащего ген Дест-Лиз, и показано, что такой фермент обладает всеми функциями, свойственными нативному ферменту. Задачей настоящего исследова- ния является идентификация двух активных центров фермента путем выделения группы наиболее вероятных остатков на основе стереохимического анализа струк- турной модели фермента. Оценка функциональной роли выбранных аминокислот- ных остатков проводилась точечными заменами их на аланин методом сайт-на- правленного мутагенеза с последующим определением мурамидазной (гликози- дазной/лизоцимной) и изопептидазной активностей полученных мутированных форм рек. Дест-Лиз. Полученные результаты находятся в соответствии с гипоте- зой о том, что гликозидазный активный центр Дест-Лиз включает каталитические остатки Glu14 и Asp26, а изопептидазный центр фермента работает как Ser/Lys ка- талитическая диада, представленная каталитическими остатками Ser29 и Lys38. Таким образом, в группе лизоцимов беспозвоночных Дест-Лиз является первым бифункциональным ферментом, в котором предварительно установлено положе- ние изопептидазного активного центра с локализацией соответствующих катали- тических остатков.